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1、泰山醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人外周血淋巴細(xì)胞亞群抗腫瘤效應(yīng)的研究姓名：朱仲麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：宋文剛；張明徽2012-02人外周血淋巴細(xì)胞亞群抗腫瘤效應(yīng)的研究研究生：朱仲麗專業(yè)：免疫學(xué)導(dǎo)師：宋文剛教授張明徽教授中文摘要中又捅要目的對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞各亞群殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)進(jìn)行比較，尋找具有高效殺傷腫瘤細(xì)胞能力的細(xì)胞亞群，并探索體外優(yōu)勢(shì)擴(kuò)增該群細(xì)胞的方法，同時(shí)對(duì)體外擴(kuò)增的該細(xì)胞亞群的抗腫瘤效應(yīng)進(jìn)行分析，從而建立腫瘤細(xì)胞治療的新方法。方法采集健康志愿者的外周血，標(biāo)記人淋巴細(xì)胞譜系標(biāo)志CD3、CD56、CD
2、8、CD4等對(duì)各樣本淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析和分選。根據(jù)自然殺傷細(xì)胞(naturalkillercell，NK)細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxiclymphocyte，cTL)細(xì)胞在腫瘤免疫中的作用，本課題關(guān)注的淋巴細(xì)胞亞群包括CD3-CD56+CD8+細(xì)胞、CD3_CD56+CD8一細(xì)胞、CD3+CD56+細(xì)胞、CD3+CD56-CD8+細(xì)胞以及CD3+CD56-CD8時(shí)1細(xì)胞。分選的淋巴細(xì)胞亞群與8種不同個(gè)體、不同組織器官來源的人腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。通過各淋巴細(xì)胞亞群與各腫瘤細(xì)胞系的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)體
3、系，尋找到具備高效廣譜抗腫瘤能力的淋巴細(xì)胞亞群，并借助流式細(xì)胞儀對(duì)其進(jìn)行了表型和細(xì)胞因子分泌譜的檢測(cè)。利用現(xiàn)有基礎(chǔ)研究成果，通過體外添加白細(xì)胞介素2(interleukin．2，IL一2)、同種異體樹突狀細(xì)胞等方式，建立體外擴(kuò)增該細(xì)胞亞群的方法學(xué)。擴(kuò)增后細(xì)胞經(jīng)體外精細(xì)亞群分選后培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，確定其是否來自于體內(nèi)原有細(xì)胞亞群。最后通過體內(nèi)和體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，確證體外擴(kuò)增的該細(xì)胞亞群能否保持原有的抗腫瘤效應(yīng)。結(jié)果對(duì)人外周血各淋巴亞群體外殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)比較的結(jié)果表明，每個(gè)樣本中cD8+CD56+細(xì)胞對(duì)60％以上腫瘤細(xì)胞系的殺
4、傷效率最高。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，CD8+CD56+細(xì)胞活化后可表達(dá)CD25和CD69，不表達(dá)CDl07a，并分泌IL一2、腫瘤壞死因子．Q(tumornecrosisfactor—a，TNF—Q)和干擾素丫(interferon-丫，IFNI丫)等細(xì)胞因子。體外精細(xì)亞群分選后培養(yǎng)，表明體外擴(kuò)增的CD8+CD56+細(xì)胞仍然來源于原有CD8+CD56+細(xì)胞亞群。該亞群可通過添加IL．2和同種異體樹突狀細(xì)胞進(jìn)行體外活化和擴(kuò)增，且擴(kuò)增后該亞群對(duì)腫瘤細(xì)胞系的殺傷能力能夠繼續(xù)保持。體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，擴(kuò)增后CD8+cD56
5、+細(xì)胞能夠有效抑制HepG2腫瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)。結(jié)論人外周血各淋巴亞群中CD8+CD56+細(xì)胞殺傷腫瘤效應(yīng)最強(qiáng)，殺傷腫瘤譜最廣。CD8+CD56+細(xì)胞活化后表達(dá)T細(xì)胞活化相關(guān)標(biāo)志，分泌IL．2、TNF。0【和IFN_丫等細(xì)胞因子，但并不表達(dá)CDl07a，提示其抗腫瘤效應(yīng)可能通過誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，而非顆粒酶釋放途徑。本課題初步建立了cD8+cD56+細(xì)胞體外活化擴(kuò)增的方法。通過體外添加同種異體樹突狀細(xì)胞和白介素2，能夠顯著提高CD8+CD56+細(xì)胞的擴(kuò)增能力，并證明擴(kuò)增后的CD8+cD56+細(xì)胞來源于原有的cD8
6、+cD56+細(xì)胞，并能夠繼續(xù)保持其原有高效抗腫瘤能力。關(guān)鍵詞：人淋巴細(xì)胞亞群；細(xì)胞治療；抗腫瘤能力；CD8+CD56+細(xì)胞2RESEARCHoFANTI—TUMoRABILITYoFHUMANPERIPHERALBLooDLYMPⅡoCYTESUBSETSPostgraduate：ZhuZhongliSpeciali哆：SuperVisor：ImmunoIogyProf．SongWengangProf．ZhangMinghuiABSTRACTobjectIve11rytocompareanti．tumorabili
7、tyamongdif．ferenthumanperipheralbloodlymphocyte，soastofindthemostefncienttumoricidallymphocytesubset．ThenitisnecessaurytoexploreamethodtoamplifythesubsetinVitro，withthemaintenanceofanti。tumorcapacityofthissubset．Finally’thetumoricidal￡Lbilityofanlplifiedsubset
8、sshouldbeevaluatedinvitroandinvivo．MethodsPeripheralb100dwascollectedfromhealthyvolunteers，labeledwithhumanlymphoc)rtelineagemarksincludingCD3，CD56，CD8andCD4，foranalysisandsortingb
