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《成年與老年大鼠中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)學(xué)研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、成年與老年大鼠中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)學(xué)研究論文【摘要】目的研究大鼠中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元隨年齡老化的形態(tài)學(xué)變化規(guī)律，探討其退行性變的形態(tài)學(xué)依據(jù)。方法SD大鼠16只，雄性，分為成年組(45月齡)和老年組(≥18月齡)。取中腦黑質(zhì)，常規(guī)制片，連續(xù)冠狀切片，分別進(jìn)行焦油紫染色和TH免疫組化染色，用圖像分析儀分別對(duì)Nissl染色細(xì)胞、TH免疫組化染色陽性神經(jīng)元進(jìn)行計(jì)數(shù).freelorphologicalchangesofdopaminergicneuronsinsubstantianigrapactofm
2、idbraininratstoexplorethemorphologicalbasisofthedegenerativeprocess.MethodsSDratsforthepresentstudyonthsandabove18months(n=8each).RoutineparaffinsectionsadeforNisslstaining,.freelmunohistochemicalstainingandelectronmicroscopy.TheneuronsandtheTHpositivecellsin
3、thesubstantianigrapactorphometrictechnique;theultrastructureofTHpositiveneuronsicroscope.ResultsThetotalnumberofneuronsandtheproportionoftheTHpositiveneuronsinthesubstantianigrapacticroscopyshoicreticulumandaccumulatedpigmentformationintheTHpositivecellsofage
4、drat.ConclusionTheremayexistarelationbeteralreductionofdopaminergicneuronsinthesubstantialnigrapactofmidbrain.Keymunohistochemistry;electronmicroscope;tyrosinehydroxylase;rat隨著人類平均壽命的增加，神經(jīng)系統(tǒng)的老化日益受到重視。中腦黑質(zhì)神經(jīng)元在多種老年性退行性病變中起著重要作用［1］。多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元是腦內(nèi)分化最早、表達(dá)
5、遞質(zhì)以及發(fā)出軸突到靶區(qū)的神經(jīng)元之一，而中腦黑質(zhì)致密部則是DA能神經(jīng)元較為集中的區(qū)域之一［2-3］。黑質(zhì)致密部DA能神經(jīng)元的特異性變性與帕金森病（PD）有著非常密切的關(guān)系，其一直是神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn)。目前，對(duì)老年與成年大鼠黑質(zhì)致密部?jī)?nèi)DA能神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化研究得較少。本研究采用Nissl染色、酪氨酸羥化酶(tyrosinehydroxylase，TH)免疫組織化學(xué)染色及電鏡等方法對(duì)老年和成年大鼠中腦黑質(zhì)致密部DA能神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化進(jìn)行研究，探討DA能神經(jīng)元在老化過程中的變化規(guī)律，以期為研究老年性退行性疾病的發(fā)病
6、機(jī)制提供一定的形態(tài)學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康SD雄性大白鼠16只，按月齡分為成年組(45月齡，200250g)和老年組(≥18月齡，500600g)，每組8只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2取材及制片隨機(jī)取每組中的6只大鼠，戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔麻醉后開胸，從左心插管行4%多聚甲醛灌注固定后取腦，后固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋。做黑質(zhì)區(qū)段連續(xù)冠狀切片，片厚6μm，切片分組收集，分別行Nissl染色、TH免疫組織化學(xué)染色。每組中的另2只大鼠用含4%多聚甲醛-0
7、.125%戊二醛的0.1mol/L磷酸緩沖液(PB，pH7.4)灌注固定，灌注畢立即取腦并將其切成冠狀中腦厚片，把含有黑質(zhì)的腦厚片置入4%多聚甲醛-0.125%戊二醛溶液中后固定2h。用0.1mol/LPB(pH7.4)充分漂洗，腦片機(jī)200μm切片，保存于PBS中，以備透射電鏡樣本制作。1.3Nissl染色Nissl染色液由0.1%的焦油紫(Sigma公司)加少許冰醋酸制備而成。用焦油紫染色確定黑質(zhì)致密部平面，室溫下染色10min，95%乙醇快速分色(23s即可)，脫水，透明，封片，鏡檢。1.4免疫組織化學(xué)染色
8、切片脫蠟至水，用3%過氧化氫去除內(nèi)源性過氧化物酶，微波修復(fù)，0.5%正常羊血清封閉，37℃，30min。依次加入：小鼠抗TH抗體(Sigma公司，1∶3000)，生物素結(jié)合的羊抗小鼠Ig(Sigma公司，1∶50)，辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的生物素-卵白素復(fù)合物(Sigma公司)。以上各步驟之間均用0.01mol/LPBS（pH7.4）沖洗3次，每次5min。最后用D
