氫生理鹽水對角叉菜膠誘導足腫脹的抗炎效應碩士學位論文

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1、第二軍醫(yī)大學碩士學位論文氫生理鹽水對角叉菜膠誘導足腫脹的抗炎效應姓名：徐拯申請學位級別：碩士專業(yè)：航空、航天和航海醫(yī)學指導教師：蔣春雷20090501氫生理鹽水對角叉菜膠誘導足腫脹的抗炎效應摘要氧化應激在炎癥的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，一方面它可以直接損傷機體，另一方面它可以通過分子間相互作用間接地對機體造成損害。在參與炎癥過程的眾多復雜因子中，活性氧(ROS)和活性氮(RNS)非常重要，它們包括羥自由基、超氧陰離子、過氧化氫、一氧化氮、亞硝酸陰離子。有大量的實驗證明清除羥自由基和亞硝酸陰離子能夠明顯減輕炎癥的嚴重程度。最近的研究表明，氫氣能夠選擇性地清除羥自由基和亞硝酸陰離子。因此，

2、氫氣很有可能通過這一途徑而具有抗炎的效應。但是，通過呼吸道吸入氫氣的方法很不方便而且存在安全隱患，于是我們將氫氣通過高壓溶解于生理鹽水中，并探索這種含有氫氣的生理鹽水是否具有抗炎效應。本課題以角叉菜膠誘導小鼠足腫脹為實驗模型，研究氫生理鹽水對于該炎癥模型是否具有抗炎效應，并以巨噬細胞為切入點研究氫生理鹽水對炎性細胞的影響。本實驗通過足爪容積測量儀檢測了小鼠足腫脹的程度；組織化學切片觀察了炎癥局部的中性粒細胞浸潤程度；酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測了細胞培養(yǎng)上清中的TNF—n的含量；實時定量PCR檢測了RAW264．7及小鼠原代腹腔巨噬細胞中TNF．僅的mRNA水平。研究工作取得的主要結果如下：1．氫

3、生理鹽水能夠顯著抑制角叉菜膠誘導的足腫脹：以2．5ml／kg、5ml／kg、10ml／kg的氫生理鹽水的量處理角叉菜膠誘導足腫脹的動物模型，發(fā)現(xiàn)處理組腳腫脹的程度明顯低于對照組，而且’5ml／kg這個劑量效果最好。2．氫生理鹽水能夠顯著抑制炎癥局部中性粒細胞的浸潤：將氫生理鹽水處理組、非處理組及對照組的足爪做成石蠟切片，HE染色后觀察中性粒細胞浸潤程度，氫水處理組的中性粒細胞浸潤明顯比非處理組少。3．氫生理鹽水能夠減少活化巨噬細胞的TNF．0【的mRNA水平并能抑制巨噬細胞分泌TNF．口：氫生理鹽水和100ng／ml的LPS共同處理巨噬細胞1h，lh后裂解細胞通過實時定量PCR檢測TNF．

4、僅的mRNA水平，發(fā)現(xiàn)氫生理鹽水能夠抑制巨噬細胞TNF—a的mRNA的表達；氫生理鹽水和100ng／ml的LPS共同處理RAW264．7細胞4h，4h后收集上清檢測TNF—a，發(fā)現(xiàn)氫生理鹽水能夠顯著抑制由LPS引起的TNF—G產生，第二軍醫(yī)大學碩士學位論文而且這種效應具有劑量依賴性?？傊?，氫生理鹽水不論在角叉菜膠誘導的足腫脹動物模型上還是在LPS激活的巨噬細胞上都具有明顯的抗炎效應，這一效應很可能是通過清除羥自由基、亞硝酸陰離子等自由基來實現(xiàn)的。我們推測，氫生理鹽水憑借其有效性、安全性、方便性、廉價性，很可能成為我們以后治療某些炎癥疾病的藥物。在今后的工作中，我們將深入研究氫生理鹽水具有抗

5、炎效應的機制，如炎癥局部的自由基變化等。關鍵詞：氫生理鹽水，巨噬細胞，腫瘤壞死因子．Q，炎癥，角叉菜膠氫生理鹽水對角叉菜膠誘導足腫脹的抗炎效應AbstractBackground：Oxidativestressisthoughttoplayallimportantroleinthepathogenesisofinflammationnotonlythroughdirectinjuriouseffects，butalsobyinvolvementinthemolecularmechanism．Amongthecomplexfactorsinvolvedintheprocessofinflam

6、mation,reactiveoxygenspecies(ROS)andreactivenitrogenspecies(RNS)，suchasthehydroxylradical(·OH)，superoxideanion(02-)，hydrogendioxide(H202)，nitricoxidefNO)，peroxynitrite(ONOO1appeartobecriticalelements．ThereisalargeamountofevidencetoshowthatInhibitorsofNOSactivityreducetheseverityofinflammation．Itha

7、sbeenreportedrecentlythatH2selectivelyreduced·OHandON00-．So，asafreeradicalscavenger,H2mayhavetheeffectofanti-inflammation．However，inhalationofhydrogengasmaybenotconvenientfortherapeuticuse，sowedissolvedmolecularh