gdf15在口腔鱗癌中的作用機(jī)制和臨床意義

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1、GDF15在口腔鱗癌中的作用機(jī)制和臨床意義-->前言當(dāng)今社會(huì)，癌癥是威脅人類(lèi)健康及生命的重要致死因素之一。據(jù)2012年統(tǒng)計(jì)，世界范圍內(nèi)每年新發(fā)癌癥患者14,090,000例，因癌癥死亡人數(shù)為8,201,000人，口腔癌每年新發(fā)病患者300,373例，死亡145,328例，男性患者中口腔癌發(fā)病率居第11位；在中國(guó)每年新發(fā)癌癥患者3,065,000例；每年因癌癥死亡2,206,000例；口腔癌每年新發(fā)病例21,413例，其中13,656例為男性并有7,370例死于口腔癌，7,757例為女并有3,96

2、3例死于口腔癌[1]。口腔黏膜鱗狀細(xì)胞癌（OralSquamousCellCarcinoma,OSCC）是口腔癌中最常見(jiàn)的類(lèi)型，預(yù)后較差。尤其是晚期口腔鱗狀細(xì)胞癌患者，因其晚期階段易淋巴轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且原發(fā)灶局部涉及多個(gè)重要器官，使腫瘤擴(kuò)大切除的安全緣受限，即便通過(guò)手術(shù)、放療、化療及生物治療的綜合序列治療，其5年生存率僅為20%-40%[2,3]。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段、多步驟的過(guò)程，口腔鱗狀細(xì)胞癌亦如此；環(huán)境對(duì)機(jī)體的作用及機(jī)體自身的變化導(dǎo)致了口腔黏膜從正?？谇击[狀上皮細(xì)胞到過(guò)角化

3、、不同程度的異常增生，再到原位癌、侵襲性癌的演變過(guò)程（圖1）[4]。吸煙、嗜酒及咀嚼煙草檳榔是導(dǎo)致口腔癌的主要致病因素[5,6]，因口腔癌（包括口咽癌）致死的患者中42%有吸煙史，而16%有嗜酒史，在臺(tái)灣和東南亞，咀嚼煙草檳榔是口腔癌的主要致病因素[7-9]，而HPV感染與口腔癌的相關(guān)性近年來(lái)不斷得到證實(shí)[10-15]?？谇击[狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中涉及多種不同基因從染色體、RNA、蛋白等多個(gè)層次多種方式的改變，然而其確切的發(fā)生發(fā)展機(jī)制還不明確，尋找出腫瘤可能的危險(xiǎn)因素并進(jìn)行針對(duì)性預(yù)防可降低疾病的

4、發(fā)病率；通過(guò)分析篩選出的生物分子標(biāo)記物的表達(dá)與腫瘤各個(gè)臨床特征間的相關(guān)性，分析其作為診斷或預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)記物的可行性，有望更早的發(fā)現(xiàn)腫瘤或指導(dǎo)制定針對(duì)患者個(gè)體的個(gè)性化治療方案；通過(guò)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)對(duì)腫瘤的各個(gè)階段進(jìn)行研究，期望發(fā)現(xiàn)瘤發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，并以恰當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行干預(yù)，可能提高腫瘤患者的預(yù)后；因此，早期口腔鱗癌的診斷標(biāo)志物，疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、療效及預(yù)后評(píng)估指標(biāo)的研究是當(dāng)下研究的熱點(diǎn)。腫瘤的體外癌變模型是研究腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要手段。HPV病毒對(duì)口腔鱗癌發(fā)生的作用最先由Syrjanen等人報(bào)道[1

5、6]，并在后期的研究中被不斷證實(shí)[17]。Termine等通過(guò)meta分析對(duì)4852例口腔鱗癌患者進(jìn)行系統(tǒng)性回顧研究證實(shí)：24.1%的OSCC患者有HPV感染(95%CI,16.8–31.4%)，其中HPV16和HPV18的感染率分別為68.2%和34.5%[18]。許多文獻(xiàn)證實(shí)將HPV病毒DNA導(dǎo)入正常上皮細(xì)胞的DNA序列可使細(xì)胞永生化[19-21]，本課題組前期研究中，我們通過(guò)轉(zhuǎn)染HPV16E6/E7基因片段到正?？谇火つど掀ぜ?xì)胞使其轉(zhuǎn)變?yōu)槿擞郎掀ぜ?xì)胞（humanimmortalized

6、oralepithelialcell(HIOEC)line）[22]。然而HPV16病毒基因序列單獨(dú)作用僅僅可使口腔上皮永生化，并不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞惡變?？谇话┑陌l(fā)生與煙草的關(guān)系已被反復(fù)證實(shí)，苯并芘在其中起了重要作用[23,24]。苯并芘是一種常見(jiàn)的致癌物，廣泛存在于煤焦油，煤、石油等燃燒產(chǎn)生的煙氣、香煙煙霧、汽車(chē)尾氣中，以及工業(yè)污水中，然而已有文章證實(shí)苯并芘單獨(dú)作用亦無(wú)法導(dǎo)致口腔上皮癌變[25]。在前期的工作中，本課題組通過(guò)苯并芘誘導(dǎo)HIOEC細(xì)胞，使其逐步癌變，變?yōu)榭谇击[狀上皮癌細(xì)胞：HIOEC-

7、B(a)P-96簡(jiǎn)稱(chēng)HB96細(xì)胞。HIOEC細(xì)胞經(jīng)苯并芘誘導(dǎo)，從第56代細(xì)胞開(kāi)始細(xì)胞成瘤，命名為HIOEC-B(a)P-56簡(jiǎn)稱(chēng)HB56。而從第96代細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)較差的分化且在組織病理學(xué)上同典型的鱗狀細(xì)胞癌近似，命名為HIOEC-B(a)P-96簡(jiǎn)稱(chēng)HB96細(xì)胞[26]。………第一章：生長(zhǎng)分化因子15在口腔鱗狀細(xì)胞癌癌變模型及口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中的表達(dá)在前期課題組的工作中，我們通過(guò)基因芯片篩選出由口腔黏膜永生化細(xì)胞系HIOEC細(xì)胞逐步癌變成為口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系HB96細(xì)胞過(guò)程中的差異基因，其

8、中GDF15在癌變過(guò)程中表達(dá)逐漸增高。然而基因芯片存在一定概率的假陰性或假陽(yáng)性，并且體外建立的癌變模型與體內(nèi)腫瘤形成過(guò)程及腫瘤細(xì)胞系存在一定的差別，因此有必要以更多的方法在多種腫瘤細(xì)胞系中進(jìn)一步驗(yàn)證GDF15的表達(dá)。本章就GDF15在口腔黏膜上皮癌變模型和口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，為后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。1.1材料與方法1.1.1口腔粘膜癌變模型細(xì)胞系及口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系的培養(yǎng)1.1.1.1試劑耗材及培養(yǎng)儀器恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱：日本SANYO公司倒置顯微鏡：日本Nikon公司Sa