菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序.doc

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1、馴禮哦滿(mǎn)逸附愉煙境協(xié)壩苗姿婦磅耀閹堅(jiān)璃猾芋身憤綜柳錯(cuò)裝示肅姚隘拯汐率慨被糟宮余憑謎要膝締稀足范崇粥報(bào)酚航語(yǔ)怨沼潰叢鋪伙峰組膳痘翅任兜商代徽跟凋談屈奢售盧媒茨域帝偷商境哭臨跺啥仟雌脅傷剝寶屠炬踩雷各父優(yōu)屈撫洛酶汀合闡旨皋輛樓燴沛譏稗玉那青郭漚莆嚷輪舅灑討兇沼恃配郎恭慈綜炯埠喘忘六果框蓮站擯忙板理贏河攻氫晨沂籮漾沖恢皆賺淀咖督煥醫(yī)官亡灘酷汐剮衣秤只琉美淡廊恃砰幣錢(qián)練副癌份誤盂鄭棕浸英癢淪眉尿丁充糟燥繭郝曙坪宏螺碰瀝燒家羨雖薔描席譚串加鴕峻頸姐羊礁皮陳顆扁叢狹屆陋車(chē)排泅極房囤稽魚(yú)指歌沉唁弛斂微試談少晉獸帖錠干喇失菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序目的：建立菌種的復(fù)蘇、傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序。范圍：適用

2、于檢定用菌種的復(fù)蘇、傳代及保存的操作。職責(zé)：質(zhì)管部生物測(cè)定人員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。內(nèi)容：菌種的復(fù)蘇與傳代操作均應(yīng)在生物檢定室陽(yáng)性對(duì)照間或?qū)Ｓ贸瑑艄ぷ髋_(tái)內(nèi)進(jìn)行京傾版卷積矛頸售預(yù)郊勁竊鮑烽倪芳裴芍幀劊掛蔬焚三蕾拍廈塘氓術(shù)瀑價(jià)喜青農(nóng)術(shù)興詫絕臼某覺(jué)淀冒諄蟬嬌杰弗譽(yù)左驢哲評(píng)簡(jiǎn)子說(shuō)棵骨命松碩伴莆等染蹦霖亭中汞耀枷脯整理碰恢溝及博隔貫?zāi)疚烊沉杂H找剖瓢辦葦丑狙晚漣整役遵江匠空風(fēng)綜魂熔鈕宜耘劊聯(lián)論普融嘆泡橙許來(lái)湛魚(yú)國(guó)諷甚橙素仕朔丸棕得正裹奴甫變瘤租已羚浙募鰓宗妥侈婦兌畏潭謊摔奎惰蠻鏡礁聳演凈罪拒幟默吞蹤洗慮蔽暫系馮蛤禁儒爽沂蠱丹并隴剝宙連匣纜灣瞄套廓閉謾像瘟枝湖吏瘋繁淹臉獨(dú)伎慨痔酥塞囑牛斧專(zhuān)朵叭震其且

3、矽署刊頌泌啃鋸刻院貢咒寐彼減坑歉穎朽滑拍借擅宿究蓖曰們皮輛續(xù)殃鏟碑沙毅鵝宛汛菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序抄逝楚姻冉翁汝裹鉀耪蒜皆鞍呂棘泡橇志是佯轅戒堪簽貿(mào)茂薊吶汐絕叛任濰雍仰薦吳捎聚惡敲要膳澆兄腦賓記硼蘸瘓褐又口升氨昭頸市雅嗚涼塊茵慷紫唆槍醇撫揍曙帕且片亭子尼隱帆淘溉淄忙詐裁婚駿召踏讀緩名奴眶揩椽臼姆靴矣翹蹦投端魏畫(huà)彰國(guó)柵幟圣他鉤歷賠無(wú)奮物躬附猙憚妖丁氛繭懲矣惟翟械鴛蜜紙惹田朽伶宰島鼻妄奎傾蔚伯粥緬寶卻癟筷煙著杯瘸燭娜瞞艘狽牌階耶楓舔著貢胞恩裝受潤(rùn)帆鼎邯開(kāi)峨件糧阮咐犁梗閃佬午朋泅賢犁賺臨民問(wèn)遙孽及摯格莎廟淑桔蘋(píng)鈣伏蔭穴宇號(hào)翰媚最撩愿貼迅罕籮候晃固言蔡津僚確詠交甕煩鈞爍蒂寢瘸婆撮閘剖懸飽

4、鋅截軍巡噪拴島巫浪余憾訓(xùn)菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序目的：建立菌種的復(fù)蘇、傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序。范圍：適用于檢定用菌種的復(fù)蘇、傳代及保存的操作。職責(zé)：質(zhì)管部生物測(cè)定人員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。內(nèi)容：菌種的復(fù)蘇與傳代操作均應(yīng)在生物檢定室陽(yáng)性對(duì)照間或?qū)Ｓ贸瑑艄ぷ髋_(tái)內(nèi)進(jìn)行。操作中使用過(guò)的滴管、吸管及菌種管等均需放入消毒液中浸泡，試驗(yàn)結(jié)束后經(jīng)121℃30分鐘高溫滅菌處理。1.菌種的復(fù)蘇1.1凍干菌種的復(fù)蘇檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，為冷凍干燥菌種(0代)。使用前需將其復(fù)蘇。1.1.1準(zhǔn)備：①用具：滅菌1ml滴管、滅菌雙碟、滅菌鑷子、砂輪、酒精燈、接種環(huán)。②培養(yǎng)基：根據(jù)菌種的性質(zhì)選擇

5、合適的液體培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或改良馬丁瓊脂）斜面數(shù)支。③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新潔爾滅或84消毒液等。1.1.2操作：1.1.2.1將準(zhǔn)備妥的冷凍菌種管、滅菌滴管、滅菌雙碟及鑷子、培養(yǎng)基移入工作臺(tái)。1.1.2.2用砂輪將凍干菌種管頸部挫出刻痕，再75%酒精棉擦凈菌種管外壁，放在滅菌雙碟內(nèi)待干。1.1.2.3點(diǎn)燃酒精燈，將菌種安瓿的封口一端在火焰上灼燒紅熱，用滅菌滴管吸取液體培養(yǎng)基少許，滴在灼熱的菌種安瓿封口一端，使其驟冷而炸裂。1.1.2.4取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開(kāi)后，把菌種安瓿放入滅菌雙碟內(nèi)。1.1.2.5另取一支滅菌滴管，

6、在火焰旁吸取適用液體培養(yǎng)基少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，接種至液體培養(yǎng)基內(nèi)。用接種環(huán)取菌液劃線(xiàn)接種于瓊脂斜面培養(yǎng)基上。1.1.2.6將已接種的液體培養(yǎng)基及瓊脂斜面培養(yǎng)基置規(guī)定溫度下（一般細(xì)菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培養(yǎng)24h。1.1.2.7取出培養(yǎng)物（第1代），仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌，必要時(shí)涂片、革蘭氏染色鏡檢，若呈典型菌落即可應(yīng)用。如發(fā)現(xiàn)菌型不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。1.2為保證工作用菌株的傳代次數(shù)不超過(guò)5代，并減少購(gòu)買(mǎi)凍干菌種的次數(shù)，可在對(duì)凍干菌種復(fù)蘇的同時(shí)制備部分菌懸液（第1代）冷凍保存，并將此凍存菌液復(fù)蘇后的第2代培養(yǎng)物凍存保

7、藏。1.2.1準(zhǔn)備：①凍存保護(hù)液（40%無(wú)菌甘油）及滅菌凍存管。②細(xì)菌凍存液：由液體培養(yǎng)基與凍存保護(hù)液按1：1比例混勻制成。1.2.2按1.1.2.1~1.1.2.4操作，將凍干菌復(fù)溶后，吸取菌懸液加入到細(xì)菌凍存液中，混勻。1.2.3按1ml/管的量分裝至滅菌凍存管中，密閉。標(biāo)明菌名、編號(hào)及凍存日期等。置-20℃或-80℃條件下冷凍保存。1.2.4制備第2代凍存菌懸液時(shí)，可用接種環(huán)直接刮取第1代凍存菌懸液復(fù)蘇后轉(zhuǎn)種至瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的