實驗三 丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用

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1、實驗三丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用一實驗?zāi)康模‥xperimentalObjectives）：1．掌握競爭性抑制作用的概念和特點。2．了解影響酶活性的其它因素。3．分析實驗現(xiàn)象。二、實驗原理(ExperimentalPrinciples)：影響酶活性的因素：溫度pH值激活劑抑制劑對酶活性的抑制作用分類不可逆性抑制作用競爭性抑制作用反競爭性抑制作用可逆性抑制作用非競爭行抑制作用競爭性抑制作用抑制劑(I)與底物(S)的結(jié)構(gòu)相似，能與底物競爭酶的活性中心，從而阻礙酶底物復(fù)合物的形成，使酶的活性降低。這種抑制作用稱為競爭性抑制作用。反應(yīng)模式+IEIE+SE+PE

2、S[S]>>[I]：高濃度的底物可解除抑制競爭性抑制作用特點1、I結(jié)構(gòu)常與S結(jié)構(gòu)類似2、I/S與酶的結(jié)合部位相同:酶的活性中心3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用4、(表觀）Km值增大，Vm值不變抑制劑↑1/V1/[S]無氧丙二酸與琥珀酸競爭琥珀酸脫氫酶琥珀酸琥珀酸脫氫酶FADFADH2延胡索酸甲烯藍(lán)（MB）甲烯白（MBH2）+FAD三、實驗材料、主要儀器和試劑（Equipments,MaterialsandAgents）（一）主要儀器：離心機(jī)、恒溫水箱。（二）主要試劑：1．0.2mol/L琥珀酸2．0.02mol/L琥珀酸3．0.2mol/L丙二酸4．0.

3、02mol/L丙二酸上述四中溶液調(diào)節(jié)pH值為7.4。5．0.02%甲烯藍(lán)6．1/15mol/L的Na2HPO4四、操作步驟（OperatingProcedure）1酶的提取液的制備：將兔子處死，取出肝臟，切成碎片后，放入乳缽中，每組取8g左右，加入1/15mol/L的Na2HPO4溶液5ml研成糊狀后，再加入5ml1/15mol/L的Na2HPO4溶液，混勻后，倒入離心管中，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心4分鐘，取上清液轉(zhuǎn)入其它試管備用。2、取試管5支，按照下列表格操作：3、各管混勻后，沿試管的內(nèi)壁加入石蠟油（隔絕空氣），放置到37℃水浴中保溫，觀察各管甲烯藍(lán)的褪色情況，

4、并記錄褪色的所需要的時間，解釋其現(xiàn)象。五、結(jié)果與分析：（ResultsandAnalysis）根據(jù)實驗的現(xiàn)象，觀察得到的結(jié)果，并解釋其相關(guān)的實驗現(xiàn)象。為什么滴石蠟油？六、思考題：(Questions)什么叫酶的競爭性抑制作用？舉例說明在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。七.注意事項：(Notices)1．注意密切觀察顏色變化。2．加入各種試劑要注意看清標(biāo)簽，不能混用各試劑瓶瓶蓋。