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《黃曲霉毒素生防細菌分子鑒定及其抑毒活性物質(zhì)的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、國內(nèi)圖書分類號：Q933國際圖書分類號：579理學(xué)碩士學(xué)位論文黃曲霉毒素生防細菌的分子鑒定及其抑毒活性物質(zhì)研究碩士研究生：王琢導(dǎo)師：閆培生教授申請學(xué)位：理學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)：遺傳學(xué)所在單位：生命科學(xué)與工程系答辯日期：2007年7月授予學(xué)位單位：哈爾濱工業(yè)大學(xué)ClassifiedIndex:Q933U.D.C:579ADissertationfortheMasterDegreeofScienceMOLECULEIDENTIFICATIONOFAFLATOXINBIOCONTROLBACTERIUMANDCHARACTERIZATION
2、OFITSANTIAFLATOXIGENICACTIVESUBSTANCESCandidate：Supervisor：WANGZhuoProf.YANPei-ShengAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpecialty：Affiliation：DateofDefence：GeneticsDepartmentofLifeScienceandEngineeringJuly2007Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnol
3、ogy哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文對已篩選獲得的能抑制黃曲霉毒素生物合成途徑中第一個穩(wěn)定中間產(chǎn)物Norsolorinicacid(NA)產(chǎn)生的，并且擁有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的生防細菌Hitwh-B05菌株進行16SrDNA分子鑒定、形態(tài)生理特征和產(chǎn)生抑毒活性物質(zhì)性狀的遺傳穩(wěn)定性、發(fā)酵適宜溫度、抑毒活性物質(zhì)的有效保藏期等方面進行研究，并初步建立提取純化其發(fā)酵產(chǎn)生的抑毒活性物質(zhì)的方法，為進一步純化、鑒定抑毒活性物質(zhì)、探明其抑制NA繼而抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的機理打下基礎(chǔ)。通過對Hitwh-B05菌株的形態(tài)生理特征和16SrDNA鑒定，
4、明確其為芽孢桿菌屬中的枯草芽孢桿菌，該菌株產(chǎn)生抑毒活性物質(zhì)的能力具有良好的遺傳穩(wěn)定性(至少可穩(wěn)定遺傳10代)，連續(xù)轉(zhuǎn)接10代中發(fā)酵上清液對寄生曲霉NA突變株產(chǎn)生NA的抑制率均為100％，而對菌絲體生長的抑制率為75％~98.7%。該菌株適宜的發(fā)酵溫度為35℃，發(fā)酵上清液對菌絲體生長的抑制率為76.32％以上，對NA產(chǎn)生的抑制率則可達到100％。而發(fā)酵上清液保存時間在一年以內(nèi)不會影響其中的抑毒活性物質(zhì)的穩(wěn)定性，保存0天、保存半年和保存一年的發(fā)酵上清液對NA產(chǎn)生的抑制率均為100％，對菌絲體生長的抑制率分別為84.78％、98.04％和
5、92.96％，t檢驗表明與對照差異不顯著；利用寄生曲霉產(chǎn)毒菌株進行研究表明，能完全抑制NA產(chǎn)生的發(fā)酵液同樣能完全抑制黃曲霉毒素的產(chǎn)生。用不同極性有機溶劑對Hitwh-B05菌株發(fā)酵上清液中抑毒活性物質(zhì)的提取與純化方面的研究表明，除氯仿提取物僅對寄生曲霉NA突變株的菌絲體生長有抑制效果外，苯、乙酸乙酯和正丁醇提取物對菌絲體生長和NA產(chǎn)生均有較好的抑制效果，對菌絲體生長的IC50分別為苯1.218mg/ml，乙酸乙酯0.075mg/ml，正丁醇0.530mg/ml，對NA產(chǎn)生的IC50分別為苯0.481mg/ml，乙酸乙酯0.029mg
6、/ml，正丁醇0.318mg/ml，這表明Hitwh-B05菌株發(fā)酵上清液中含有多種類的抑毒活性物質(zhì)，并且可初步判斷抑制效果較好的抑毒活性物質(zhì)的極性較高。對乙酸乙酯和正丁醇的提取物通過薄層層析進一步純化，分別獲得14和13條區(qū)帶，通過微孔板培養(yǎng)結(jié)果表明，對寄生曲霉NA突變株產(chǎn)生NA有較好抑制作用的區(qū)帶總數(shù)分別為5條和7條。乙酸乙酯提取物對NA的產(chǎn)生有抑制作用的分離區(qū)帶中，帶9濃度在0.3mg/ml時能夠完全抑制NA的-I-哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)生，帶11、12、13和14濃度在0.075mg/ml時就能夠完全抑制NA的產(chǎn)生
7、，而對菌絲體生長則沒有明顯的抑制作用，即使當(dāng)濃度達到0.3mg/ml時，對菌絲生長也未表現(xiàn)出明顯的抑制作用。正丁醇分離區(qū)帶中抑制效果最好的為帶1，Tipculture結(jié)果表明，區(qū)帶1在0.05mg/ml濃度下可完全抑制NA的產(chǎn)生，而對菌絲生長的抑制率可達32.20％，微孔板實驗中，當(dāng)其濃度達1.0mg/ml時能完全抑制寄生曲霉孢子的萌發(fā)。本研究結(jié)果表明了Hitwh-B05菌株為一優(yōu)良的生防細菌新菌株，對其發(fā)酵產(chǎn)生的抑毒活性物質(zhì)進一步分離純化及進行結(jié)構(gòu)鑒定將為黃曲霉毒素污染的生物防治提供新的先導(dǎo)化合物和生物新農(nóng)藥。關(guān)鍵詞黃曲霉毒素；
8、生防細菌；抑毒活性物質(zhì)；鑒定；提取-II-哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractWehavestudiedHitwh-B05strain,whichcaninhibitastableintermediateproductNor
