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《rna干擾的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、RNA干擾的研究摘要：RNA干擾足指巾dsRNA介導(dǎo)的特異靶序列mRNA基岡沉默的現(xiàn)象，白1998年發(fā)現(xiàn)以來，在分子生物學(xué)研究方而己取得秉大進(jìn)展。特別足在哺乳動(dòng)物中的應(yīng)用研究，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)URNA載體，有效篩選siRNA靶序列方而取得了突破，而且在難因功能研究，遺傳病的難因治療，胞內(nèi)抗病毒免疫，機(jī)體水平應(yīng)用研究方面也杏了重人進(jìn)展。關(guān)鍵詞：RNAT擾；基因沉默；靶序列；引物；發(fā)卡結(jié)構(gòu)TheresearchofRNAinterferenceHenanZhang(07BiologicalClass，MedicalCollegeofSun-yats
2、enuniversity)Abstract：RNAinterferencemeansthephenomenonofspecificmRNAgenesilencecausedbytheinterpositionofdsRNA.Sincediscoveredin1998,RNAihasgotgreatprogressonBiologyresearch.Peoplehavegotbreakthroughespeciallyontheapplianceresearchofmammals，thebuiltofthestablesiRNAcarrier
3、andtheefficientselectionofsiRNAtargetsequence.Andpeoplealsogotgreatprogressongenefunctionresearch，genetherapyofheredopathia，endocellanti-viralimmunityandapplianceresearchofbodylevel.Keywords:RNAinterference;genesilence;targetsequence；prime；hairpinRNAT擾(RNAi)真正被確定是Fire于1998
4、年在秀麗線蟲中發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)錄后的基因沉默［1］，并且引起了分子生物學(xué)家和遺傳學(xué)家等的很大興趣。RNA十?dāng)_廣泛存4:于各種生物中包括：從真菌到枬物，從無脊椎動(dòng)物到哺乳類動(dòng)物等幾乎所有真核生物。并很快從對線蟲的研究擴(kuò)展到了對錐蟲、果蠅、脊椎動(dòng)物以及醫(yī)學(xué)腫瘤［2］、微生物遺傳病基因治療、基因功能研究［5］等多個(gè)領(lǐng)域。1.RNA干擾的發(fā)現(xiàn)歷史:最初在1990年，Jorgensen等［6］在研究怎樣增多矮牽?；ǖ念伾珪r(shí)，就觀察到一種當(dāng)時(shí)無法解釋的現(xiàn)象：希望通過導(dǎo)入紫色色素合成酶基因增加色素基因拷貝，從而得到紫色加深的矮牽牛花；仴結(jié)果確是，一些矮牽卞花的
5、紫色不但沒有加深，反倒使開出的花呈部分或全部的白色。進(jìn)一步的研究說明，這些導(dǎo)入的基因非但沒得到表達(dá)，并且使矮牽中花自身的基因表達(dá)受到了抑制。作者當(dāng)吋稱之為共抑制(cosuppression)o到了1994年，Cogoni［7］等發(fā)現(xiàn):向鏈孢霉菌中轉(zhuǎn)入albinol(al-1)或albino3(al-3)基因后，內(nèi)源性al-1或al-3基因表達(dá)水乎人人降低。當(dāng)時(shí)將這種真苘屮的基因表達(dá)抑制現(xiàn)象叫做消除作川(quelling)o1995年Guo等［8］在研究秀麗線蟲胚胎的第一次卵裂時(shí)發(fā)現(xiàn)，給它注射par-1基因的反義KNA可以阻斷par-1的轉(zhuǎn)錄
6、和翻譯，但是對照組中的正義RNA也得ill了樣的結(jié)果。1998年Fire等［9］用RNA聚合酶在體外轉(zhuǎn)錄出了與秀麗線蟲發(fā)竹等相關(guān)基因的正、反以RNA，并且純化之后導(dǎo)入秀麗線蟲，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)入的RNA可以抑制基因的表達(dá)，并且dsRNA比ssRNA效果更好，從此將這種現(xiàn)象命名為RNA干擾(RNAi)。并JI發(fā)現(xiàn)，dsRNA經(jīng)過秀麗線蟲腸道注射時(shí)，所產(chǎn)生的RXAi討以4:細(xì)胞間傳遞并傳至子代。2.RNA干擾的基本原理RNA干擾(RNAi)指發(fā)生在動(dòng)植物屮由dsRNA指異的mRNA序列特異性降解的現(xiàn)象，它分為啟始階段和效應(yīng)階段兩個(gè)階段。對于哺乳動(dòng)物的細(xì)胞
7、，啟始階段中細(xì)胞內(nèi)RNasdlldicer從dsRXA鏈兩端進(jìn)行切割，產(chǎn)生19-23個(gè)核昔酸的dsRNA片段,即小干擾RNA(smallinterferingRNA,siRNA),其3’端含有2—3個(gè)核苷酸突出端，5’端磷酸化。效應(yīng)階段為：siKNA進(jìn)入RNA誘導(dǎo)的沉寂復(fù)合物(RISC),并且RISC復(fù)合物是蛋白質(zhì)-RNA效應(yīng)子核酸酶g合體。siRXA進(jìn)人后，由于位置構(gòu)象原因而被解鏈成正義鏈和反義鏈，由反義鏈引異RISC和與之互補(bǔ)的靶RNA雜交，一只與靶RNA雜交RTSC上的核酸酶以則一定的閩隔，在被識別的2個(gè)核昔酸序列的中部進(jìn)行切割，在兩
8、端規(guī)律性地產(chǎn)牛.21個(gè)核苷酸的RNA片段［1°］。RNAi屬于進(jìn)化上非常保守的適應(yīng)性應(yīng)答機(jī)制，它能介導(dǎo)細(xì)胞對內(nèi)源寄生性核酸和外源病原體核酸產(chǎn)生抗性，調(diào)節(jié)蛋白編碼基因的表達(dá)。RNA
