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《小檗堿增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的實(shí)驗(yàn)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、小漿堿增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞順鉗敏感性的實(shí)驗(yàn)研究羅芳（武漢市普仁醫(yī)院婦產(chǎn)科430081）【中圖分類號】R737.31【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-5085（2013）07-0106-02【摘要】目的探討小漿堿對卵巢癌細(xì)胞順鉗敏感性的影響。方法MTT方法檢測細(xì)胞抑制率。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。Westernblot檢測PDCD4蛋白表達(dá)。結(jié)果小漿堿增強(qiáng)順鉗對SKOV3細(xì)胞增殖的抑制，增強(qiáng)順鉗誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞凋亡，提高PDCD4在SKOV3細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)論小葉堿能增加卵巢癌細(xì)胞對順鉗的敏感性，有可能成為一種新的卵巢癌治療藥物。卵巢癌是嚴(yán)重威脅女性牛命健
2、康的最常見惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在牛殖系統(tǒng)惡性腫瘤中，卵巢癌的發(fā)病率居第三位，并且有逐年上升趨勢，其5年生存率低于45%[l]o目前，腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后聯(lián)合多療程化學(xué)藥物治療是卵巢癌的基木治療原則。因此，化學(xué)藥物治療在卵巢癌治療中占相當(dāng)重要的地位。治療過程中腫瘤細(xì)胞常常對化療藥物產(chǎn)牛耐藥性，使化療藥物的療效喪失，從而導(dǎo)致化療失敗和腫瘤復(fù)發(fā)。木研究擬通過體外實(shí)驗(yàn)觀察小藥堿對順鉗耐藥人卵巢癌藥物敏感性的影響，并且探討其中可能的機(jī)制，以期利于含小漿堿中藥的現(xiàn)代化開發(fā)，及為卵巢癌耐藥的防治提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1細(xì)胞培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV-3
3、購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞牛物所。培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素RPMI1640培養(yǎng)液中，置于5%CO2,37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對數(shù)牛長期細(xì)胞進(jìn)行指標(biāo)檢測。1.2細(xì)胞體外牛長活性檢測采用MTT（四甲基偶氮哇藍(lán)，美國Sigma公司）方法檢測順鉗單獨(dú)作用和順鉗聯(lián)合小葉堿（美國Sigma公司）作用SKOV-3細(xì)胞72h后的吸光度（0D）值。細(xì)胞牛長抑制率（％）二[（對照組0D值■實(shí)驗(yàn)組0D值）/對照組0D值]×100%o1.3流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡消化SKOV3細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,PBS洗2次，用PBS重懸細(xì)胞，調(diào)整
4、細(xì)胞密度l×105/mlo一組加入終濃度為2.5mg/L的順鉗;一組加入終濃度為10μmol/L小槃堿和25μg/ml的順鉗。培養(yǎng)24h,預(yù)冷PBS洗滌，收集細(xì)胞。100μlPBS重懸細(xì)胞,PBS洗滌2次”加入5μlAnnexinVFITC和20μl碘化丙唳(PI)溶液,室溫避光孵育30min,il4000尼龍網(wǎng)篩，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡分析。1.4PDCD4蛋白表達(dá)的檢測:收集各處理組細(xì)胞，裂解緩沖液提取細(xì)胞總蛋白'經(jīng)Bradford法定量后進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳上樣量為20μg,將電泳后分離的蛋
5、白電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜(NC)上。轉(zhuǎn)移后的NC膜采用3%脫脂牛奶封閉30min,室溫下于PDCD4一抗中孵育90min；洗滌后，加入二抗室溫孵育60min;于ECL(Pierce)試劑中作用lmin,攝片。以GAPDH為內(nèi)參照,Lab-Work3.0UVP軟件分析條帶的光密度值。目的蛋白二目的基因條帶光密度/GAPDH條帶光密度。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1小槃堿增強(qiáng)順鉗對SKOV3細(xì)胞增殖的抑制通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)小漿堿
6、對SKOV3細(xì)胞最大非毒性濃度為10μmol/L。此濃度小槃堿聯(lián)合不同濃度順鉗作用于SKOV3細(xì)胞，抑制率見表1。從表中，可以明顯發(fā)現(xiàn)，小槃堿增強(qiáng)順鉗對SKOV3細(xì)胞增殖的抑制。表1各處理組的抑制率(％)*與不聯(lián)合小槃堿組比較，P<0.052.2小漿堿增強(qiáng)順鉗誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞凋亡我們采用10μmol/L小菓堿和25μg/ml的順鉗共同作用SKOV3細(xì)胞24h,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率為3±3.9%,明顯高于順鉗單獨(dú)作用組的6.5±2.4%(女口圖1),說明小漿堿可以增強(qiáng)順鉗誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞凋亡。圖1各處理
7、組凋亡率2.3小漿堿提高PDCD4在SK0V3細(xì)胞的表達(dá)有研究發(fā)現(xiàn)，PDCD4表達(dá)下降與卵巢癌耐藥相關(guān)，抑制PDCD4表達(dá)可以誘導(dǎo)卵巢癌耐藥的發(fā)生。本研究通過westernblot方法發(fā)現(xiàn)，小槃堿作用后，可提高PDCD4在SKOV3細(xì)胞的表達(dá)，如圖2所示。圖2各處理組PDCD4蛋白表達(dá)3討論卵巢癌確診時多屬于中晚期，死亡率高居?jì)D科惡性腫瘤之首，已成為嚴(yán)重威脅女性生命和健康的疾病之一?；瘜W(xué)治療（化療）是卵巢癌治療的重要手段，然而化療敏感性降低是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。近年來，國內(nèi)外發(fā)展了一系列腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑。從天然植物中，尤其是從傳統(tǒng)中藥中提取有效成分，已
8、成為耐藥逆轉(zhuǎn)研究的熱點(diǎn)。小藥堿是從中草藥黃連、黃柏、三棵針等提取的活性成分,研究
