榨菜低鹽腌制體系中優(yōu)勢種群的分子鑒定及分析【開題報告】

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1、畢業(yè)論文開題報告生物工程榨菜低鹽腌制體系中優(yōu)勢種群的分子鑒定及分析一、選題的背景與意義蔬菜的腌制加工，在我國已有悠久的歷史,但是傳統(tǒng)的蔬菜腌制工藝均采用高鹽進(jìn)行腌制。成品鹽度太高，而食用過多的食鹽對人體某些器官會造成永久性損壞。因此，我國人民對高鹽腌制食品也越來越不歡迎。低鹽腌制蔬菜因其可以保持蔬菜原有的營養(yǎng)成分以及有益人體健康而受到越來越多的消費者的喜愛，并在迅速占領(lǐng)市場。在低鹽條件下勢必引起各種微生物的生長，因此，在此條件下使腌制保藏過程正?；倪^程是一個十分復(fù)雜的微生物學(xué)發(fā)酵過程，同吋伴隨著復(fù)雜的生物化學(xué)變化和

2、物理變化。日前，我國各種蔬菜腌制品的發(fā)酵，都是借助于天然附著在蔬菜表面上的微生物的作用來進(jìn)行的。據(jù)測定,蔬菜收獲后表面所含的微生物不僅種類多，而且數(shù)量大，但有益菌一般數(shù)量都較低。本研究采用的SSCP方法體現(xiàn)了一種快速、簡易的研究微生物群落結(jié)構(gòu)的方法，但是測序列較短，個別可能只確定屬、科分類地位，無法精確地鑒定到種，所以結(jié)合16SrDNA/rRNA的序列分析來進(jìn)-步進(jìn)行研究。我們從環(huán)境微生物樣品中提取出rRNA或總DNA后，利用PCR擴(kuò)增、和DNA測序等技術(shù)分析微生物樣品的16SrDNA,從而對環(huán)境微生物進(jìn)行檢測，或?qū)?/p>

3、其進(jìn)行分類、定位。rDNA或rRNA序列既具有保守性，又具有高變性，是冃前細(xì)菌分類和鑒定經(jīng)常使用的一種檢測方法。本研究采用分子檢測的方法和傳統(tǒng)微生物學(xué)方法相結(jié)合，總結(jié)出蔬菜腌制體系中的特征微生物。根據(jù)已有的實驗基礎(chǔ)進(jìn)一步系統(tǒng)地研究主要微生物對風(fēng)味的形成、和營養(yǎng)作用等，從而揭示腌制體系得到優(yōu)良產(chǎn)品的重要微生物的貢獻(xiàn)。二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：研究內(nèi)容：（1）蔬菜腌制過程中微生物含量和發(fā)酵液pH的測定關(guān)鍵吋間點分別取蔬菜腌制液，測出發(fā)酵液中所含微生物的總量和乳酸菌的數(shù)量，并測定蔬菜腌制液的pHo（2）蔬菜腌制

4、過程屮優(yōu)勢菌系的分子分析關(guān)鍵時間點分別取蔬菜腌制液，采用16SrDNA建立該腌制體系的基因文庫并且與單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）方法、傳統(tǒng)的分離鑒定方法進(jìn)行比較分析，總結(jié)出腌制樣品中的特征微生物。擬解決的關(guān)鍵問題：16SrDNA克隆文庫的構(gòu)建。三、研究的方法與技術(shù)路線：1技術(shù)路線：蔬菜預(yù)處理廠總菌數(shù)、乳酸菌數(shù)取樣測定、分析J

5、腌制液pH測定16SrDNA序列測定2主要方法：(1)、選取當(dāng)季蔬菜，稱量裝壇，進(jìn)行腌制(2)、根據(jù)微生物的關(guān)鍵時間點取不同鹽濃度樣，分別進(jìn)行微生物總數(shù)、乳酸菌數(shù)和腌制液pH的測定，總結(jié)出

6、腌制品質(zhì)比較優(yōu)良的鹽濃度。(3)根據(jù)最佳鹽濃度腌制菜，進(jìn)行分子檢測，總結(jié)出蔬菜腌制體系中的優(yōu)勢群落。(4)針對優(yōu)勢菌群進(jìn)行相關(guān)的功能分析。四、研究的總體安排與進(jìn)度：2010年11月初—2010年11月底：實驗前的準(zhǔn)備工作：查找資料，撰寫開題報告；準(zhǔn)備實驗；2010年H月中旬一2010年12月底根據(jù)季節(jié)腌制當(dāng)季蔬菜，測定發(fā)酵過程中總菌數(shù)，確定關(guān)鍵時問點并取樣，提取并優(yōu)化提取樣品中細(xì)菌總DNA的方法。2011年3月中旬—2011年4月底：采用細(xì)菌擴(kuò)增通用引物27F和1492R進(jìn)行PCR擴(kuò)增與擴(kuò)增產(chǎn)物鑒定和純化，DNA序列

7、測定與分析；2011年5月初：整理試驗結(jié)果，論文初稿和校對。五、主要參考文獻(xiàn)：[1]陳意音，食品科學(xué).94(5)：18—22⑵李雄輝.蔬菜低鹽腌制過程中的酸度變化及控制[J].中國調(diào)味品,1995,6:11-13.⑶王巖，沈錫權(quán)，吳祖芳.PCR-SSCP技術(shù)在微生物群落多態(tài)性分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]?生物技術(shù),2009,19(3):84-87.⑷薛燕，常洪，常國斌.PCR—SSCP技術(shù)在動物育種屮的研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2005,24(3)：21-25.⑸董承良，鄧昌彥.基因突變檢測技術(shù)進(jìn)展[J]?黃牛雜志，1

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