榨菜低鹽腌制體系中優(yōu)勢(shì)種群的分子鑒定及分析【開題報(bào)告】

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1、畢業(yè)論文開題報(bào)告生物工程榨菜低鹽腌制體系中優(yōu)勢(shì)種群的分子鑒定及分析一、選題的背景與意義蔬菜的腌制加工，在我國(guó)已有悠久的歷史,但是傳統(tǒng)的蔬菜腌制工藝均采用高鹽進(jìn)行腌制。成品鹽度太高，而食用過多的食鹽對(duì)人體某些器官會(huì)造成永久性損壞。因此，我國(guó)人民對(duì)高鹽腌制食品也越來越不歡迎。低鹽腌制蔬菜因其可以保持蔬菜原有的營(yíng)養(yǎng)成分以及有益人體健康而受到越來越多的消費(fèi)者的喜愛，并在迅速占領(lǐng)市場(chǎng)。在低鹽條件下勢(shì)必引起各種微生物的生長(zhǎng)，因此，在此條件下使腌制保藏過程正常化的過程是一個(gè)十分復(fù)雜的微生物學(xué)發(fā)酵過程，同時(shí)伴隨著復(fù)雜的生物化學(xué)變化和物理變化。目前,我國(guó)各種蔬菜腌制品的發(fā)酵,都是借助于天然附著在蔬菜表面上的微生

2、物的作用來進(jìn)行的。據(jù)測(cè)定,蔬菜收獲后表面所含的微生物不僅種類多,而且數(shù)量大,但有益菌一般數(shù)量都較低。本研究采用的SSCP方法體現(xiàn)了一種快速、簡(jiǎn)易的研究微生物群落結(jié)構(gòu)的方法，但是測(cè)序列較短，個(gè)別可能只確定屬、科分類地位，無法精確地鑒定到種，所以結(jié)合16SrDNA/rRNA的序列分析來進(jìn)一步進(jìn)行研究。我們從環(huán)境微生物樣品中提取出rRNA或總DNA后，利用PCR擴(kuò)增、和DNA測(cè)序等技術(shù)分析微生物樣品的16SrDNA，從而對(duì)環(huán)境微生物進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)ζ溥M(jìn)行分類、定位。rDNA或rRNA序列既具有保守性,又具有高變性,是目前細(xì)菌分類和鑒定經(jīng)常使用的一種檢測(cè)方法。本研究采用分子檢測(cè)的方法和傳統(tǒng)微生物學(xué)方法相

3、結(jié)合，總結(jié)出蔬菜腌制體系中的特征微生物。根據(jù)已有的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)進(jìn)一步系統(tǒng)地研究主要微生物對(duì)風(fēng)味的形成、和營(yíng)養(yǎng)作用等，從而揭示腌制體系得到優(yōu)良產(chǎn)品的重要微生物的貢獻(xiàn)。二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：研究?jī)?nèi)容：（1）蔬菜腌制過程中微生物含量和發(fā)酵液pH的測(cè)定關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)分別取蔬菜腌制液，測(cè)出發(fā)酵液中所含微生物的總量和乳酸菌的數(shù)量，并測(cè)定蔬菜腌制液的pH。（2）蔬菜腌制過程中優(yōu)勢(shì)菌系的分子分析關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)分別取蔬菜腌制液，采用16SrDNA建立該腌制體系的基因文庫(kù)并且與單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)方法、傳統(tǒng)的分離鑒定方法進(jìn)行比較分析，總結(jié)出腌制樣品中的特征微生物。擬解決的關(guān)鍵問題：16SrDNA

4、克隆文庫(kù)的構(gòu)建。三、研究的方法與技術(shù)路線：1技術(shù)路線：腌制蔬菜預(yù)處理成品取樣測(cè)定、分析總菌數(shù)、乳酸菌數(shù)16SrDNA序列測(cè)定腌制液pH測(cè)定2主要方法：（1）、選取當(dāng)季蔬菜，稱量裝壇，進(jìn)行腌制（2）、根據(jù)微生物的關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)取不同鹽濃度樣，分別進(jìn)行微生物總數(shù)、乳酸菌數(shù)和腌制液pH的測(cè)定，總結(jié)出腌制品質(zhì)比較優(yōu)良的鹽濃度。（３）根據(jù)最佳鹽濃度腌制菜，進(jìn)行分子檢測(cè)，總結(jié)出蔬菜腌制體系中的優(yōu)勢(shì)群落。（４）針對(duì)優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行相關(guān)的功能分析。四、研究的總體安排與進(jìn)度：2010年11月初—2010年11月底：實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：查找資料，撰寫開題報(bào)告；準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)；2010年11月中旬—2010年12月底根據(jù)季節(jié)腌制當(dāng)

5、季蔬菜，測(cè)定發(fā)酵過程中總菌數(shù)，確定關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)并取樣，提取并優(yōu)化提取樣品中細(xì)菌總DNA的方法。2011年3月中旬—2011年4月底：采用細(xì)菌擴(kuò)增通用引物27F和1492R進(jìn)行PCR擴(kuò)增與擴(kuò)增產(chǎn)物鑒定和純化，DNA序列測(cè)定與分析；2011年5月初：整理試驗(yàn)結(jié)果，論文初稿和校對(duì)。五、主要參考文獻(xiàn)：[1]陳意音，食品科學(xué)．94(5)：18—22[2]李雄輝.蔬菜低鹽腌制過程中的酸度變化及控制[J].中國(guó)調(diào)味品,1995,6:11-13.[3]王巖,沈錫權(quán),吳祖芳.PCR-SSCP技術(shù)在微生物群落多態(tài)性分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J].生物技術(shù),2009,19(3):84-87.[4]薛燕，常洪，常國(guó)斌．PCR—

6、SSCP技術(shù)在動(dòng)物育種中的研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2005，24(3)：21-25．[5]董承良，鄧昌彥．基因突變檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展[J]．黃牛雜志，1998，2(3)：49—52．[6]孫志宏,孟和,孫天松,等.分子標(biāo)記技術(shù)用于乳酸菌分類鑒定研究進(jìn)展[J].中國(guó)乳品工業(yè),2006,34(5):35-37.[7]烏日娜，張和平，孟和畢力格．酸馬奶中乳桿菌的16srDNA基因序列及聚類分析[J]．中國(guó)乳品工業(yè)，2005,33(6)：4-9．[8]李學(xué)貴,嚴(yán)曉燕.低鹽化榨菜生產(chǎn)原理及其應(yīng)用初探[J].中國(guó)釀造,2004(5):4-6.[9]吳祖芳,劉璞,翁佩芳.榨菜加工中乳酸菌技術(shù)的應(yīng)用及研究進(jìn)展

7、[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2005,31(8):73-76.[10]施安輝,周波.蔬菜傳統(tǒng)腌制發(fā)酵工藝過程中微生物生態(tài)學(xué)的意義[J].中國(guó)調(diào)味品,2002,5:11-15.[11]任濤.微生物對(duì)蔬菜腌制品風(fēng)味及品質(zhì)的影響[J].中國(guó)調(diào)味品,1989,(7):16-221.[12]BoonN,TopEM，VerstraeteW.Bioaugmentationasatooltoprotectthestr