沙門(mén)菌臨床檢驗(yàn)分析

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1、沙門(mén)菌臨床檢驗(yàn)分析劉麗萍(雙鴨山煤炭總醫(yī)院黑龍江雙鴨山155100)【中圖分類號(hào)】R378.2+2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085(2010)04-0064-03沙門(mén)菌屬?gòu)V泛分布于自然界，通常寄居于人或動(dòng)物腸道內(nèi)是腸桿菌科的重要致病菌屬，可使人和動(dòng)物致病。它由6個(gè)亞屬組成，即I、II、III、IV、V、VI和III；己發(fā)現(xiàn)的沙門(mén)菌有2000多個(gè)菌型。沙門(mén)菌是一大群形態(tài)、培養(yǎng)特性、牛化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌。沙門(mén)菌檢驗(yàn)和鑒定較為復(fù)雜，一般分為前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、牛化鑒定和血清學(xué)分型5個(gè)步驟進(jìn)行。一樣木釆集根據(jù)疾病的類型、病情和病程的不同釆取不同的樣木。1

2、.血液或骨髓液腸熱癥病人，在病程的第1?2周內(nèi)采集靜脈血，在1?3周內(nèi)不采集骨髓液。2.糞便和尿液腸熱癥病人在病程的第二周以后；胃腸炎病人在急性期、早期采集新鮮糞便，最好在用藥前采集；帶菌者可用肓腸拭了采集肓腸表面粘膜。在病稈的第二周，腸熱癥病人亦可采集中斷尿或無(wú)菌導(dǎo)尿，經(jīng)3000r/min離心沉淀后供檢驗(yàn)用。3.嘔吐物或食物等疑為沙門(mén)菌食物中毒的病人，除采集糞便外，還應(yīng)釆集嘔吐物和可疑食物樣木，新鮮肉類用無(wú)菌剪刀釆取，于無(wú)菌器皿內(nèi)送檢。4.其他樣木(1)如膽汁、腦脊液、胸水、腹水等經(jīng)離心沉淀后供用；用拭子采集中耳分泌物、滲出液、膿液、咽喉、陰道等液。(2)健康相關(guān)產(chǎn)品，可采集各類食品、

3、化妝品、衛(wèi)牛用品和藥品等。二培養(yǎng)基和試劑（1）所用培養(yǎng)基和配制緩沖蛋白腺水（BP）：氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液；四硫酸鈉煌綠（TTB）增菌液；亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液；亞硫酸鈕瓊脂（BS）；膽鹽硫乳（DHL）瓊脂;HE瓊脂;WS瓊脂;SS瓊脂三糖鐵（TSI）瓊脂；蛋白腺水、靛基質(zhì)試劑；尿素瓊脂（PH7.2）；氧化鉀（KCN）培養(yǎng)基；氨基酸脫竣酶試驗(yàn)培養(yǎng)基；糖發(fā)酵管；“2.3.25；ONPG培養(yǎng)基；半固體瓊脂；丙二酸鹽培養(yǎng)基“2320”。（2）沙門(mén)菌因子血清按照26種用于初步分型；57種用于進(jìn)一步分型；163種用于詳細(xì)分型進(jìn)行選用。檢驗(yàn)步驟（以食品中沙門(mén)菌檢驗(yàn)為例）1?前增菌和增菌凍肉

4、、蛋品、乳品及其他加工食品均應(yīng)經(jīng)過(guò)前增菌。稱取檢樣25g加入盛有225ml緩沖蛋白月東水的500ml廣口瓶?jī)?nèi)。固體食品可先以勻質(zhì)器于8000r/min打碎lmin,或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨使乳化，在36°C±l°C培養(yǎng)4h（干蛋品培養(yǎng)18~24h）,移取10ml轉(zhuǎn)種于100ml氯化鎂孔綠肉湯增菌液內(nèi)，42°C下培養(yǎng)18?24h。同時(shí)另取10ml,轉(zhuǎn)種于100ml亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，36°C±l°C下培養(yǎng)18?24h。鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品無(wú)需經(jīng)過(guò)前增菌。取檢樣25g（或25ml）加入滅菌生理鹽水25ml,按前法制成檢樣

5、勻液；取25ml接種于100ml氯化鎂孔淮綠增菌液或四硫磺酸鈉粕綠增菌液內(nèi)，在42°C下培養(yǎng)24h；另取25ml接種于100ml亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，36°C±；rC下培養(yǎng)18?24h。2?分離培養(yǎng)取增菌液1環(huán)，畫(huà)線接種于一個(gè)亞硫酸餓瓊脂平板和一個(gè)DHL瓊脂平板（或HE、WS、SS）或40?48h（BS）,觀察各平板上生長(zhǎng)的菌落,沙門(mén)菌1、II、III、IV、V、VI和沙門(mén)菌III在各平板上的菌落特征。3?生化反應(yīng)（1）從選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個(gè)可疑菌落，分別接種TSI瓊脂。在TSI瓊脂內(nèi)，腸桿菌科屬種的反應(yīng)結(jié)果。在TSI瓊脂內(nèi)只有斜面產(chǎn)酸又同時(shí)硫化氫（H2S）陰性的菌

6、株可以排除，其他的反應(yīng)結(jié)果均有沙門(mén)菌的可能，但同時(shí)也均有不是沙門(mén)菌的可能。（2）在接種TSI瓊脂抽吋，再接種蛋白腺水（作靛基質(zhì)試驗(yàn)用）、尿素瓊脂（pH7.2）、KCN培養(yǎng)基和賴氨酸脫竣酶試驗(yàn)培養(yǎng)基及對(duì)照培養(yǎng)基各1管，在36°C±l°C培養(yǎng)18?24h,必要吋可延長(zhǎng)至48h,按判定結(jié)果。按反應(yīng)序號(hào)分類，沙門(mén)菌屬的果應(yīng)屬于Al、A2和B1,其他5種反應(yīng)結(jié)果均可以排除。若有以下情況應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)：1）反應(yīng)序號(hào)A1為典型反應(yīng)者，判定為沙門(mén)菌屬。若尿素、KCN和賴氨酸3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按照可判定為沙門(mén)菌。若有2項(xiàng)異常，則按照A3判定為弗勞地枸椽酸桿菌。2）反應(yīng)序號(hào)A2應(yīng)補(bǔ)做甘露醇和山梨

7、醇試驗(yàn)，判定結(jié)果。3）反應(yīng)序號(hào)B1應(yīng)補(bǔ)做ONPG°ONPG+為大腸埃希菌，ONPG為沙門(mén)菌。同時(shí)沙門(mén)菌應(yīng)為賴氨酸（+）,但甲型副傷寒沙菌為賴氨酸（一）。4）有必要時(shí)，進(jìn)行沙門(mén)菌生化群的鑒別。4.血清學(xué)分型鑒定（1）抗原準(zhǔn)備一般采用1.5%瓊脂斜面培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。當(dāng)0血清不凝集吋，將菌株接種于含瓊脂量較高的（2.5%?3.5%）培養(yǎng)基上進(jìn)行檢查；若是因Vi抗的存在而阻止了0凝集反應(yīng)吋，可挑取菌苔于lml生理鹽水中作成濃