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《rna干擾抑制ephb4基因表達(dá)對胰腺癌panc1細(xì)胞的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾抑制EphB4基因表達(dá)對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的影響姓名：李斌申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：趙作偉201106RNA干擾抑制EphB4基因表達(dá)對胰腺癌PANC．1細(xì)胞的影響碩士生姓名：李斌指導(dǎo)教師：趙作偉教授專業(yè)名稱：外科學(xué)摘要目的：胰腺癌是一種惡性程度很高的消化系統(tǒng)腫瘤，它嚴(yán)重危害著人類的生命健康。由于它發(fā)病隱匿、進(jìn)展迅速，傳統(tǒng)治療方法的效果不能令人滿意，治療困難，預(yù)后極差，因此研究出診治胰腺癌的新方法顯得尤為重要。近年來，隨著基因治療技術(shù)的迅速發(fā)展以及胰腺癌相關(guān)
2、基因研究的不斷深入，胰腺癌的基因診斷和基因治療正在進(jìn)一步的探索中。腫瘤的血管生長及形成是促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素，所以抑制胰腺癌的血管形成，降低胰腺癌組織中的血管含量，阻止其快速增長就顯得尤為重要。EphB4受體促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，參與調(diào)控胚胎期血管形成過程中的動靜脈分化。目前，有文獻(xiàn)報(bào)道EphB4受體在胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌中的高表達(dá)與腫瘤血管的生成及侵襲性有密切相關(guān)性。RNAi通過外源性或內(nèi)源性的雙鏈RNA(dsRNA)，特異性結(jié)合了與ds．RNA序列互補(bǔ)的mRNA，誘導(dǎo)該mRN
3、A的降解，沉默該基因的表達(dá)，屬于轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默。目前，它的應(yīng)用范圍非常廣，可用于腫瘤基因功能分析和調(diào)控信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等方面，為腫瘤的基因治療提供新的目標(biāo)和途徑。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建EphB4基因的siRNA真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染胰腺癌PANC．1細(xì)胞后，研究RNAi對PANC．1細(xì)胞EphB4基因的表達(dá)和細(xì)胞增殖、遷移行為的影響，為以后進(jìn)一步研究胰腺癌基因治療提供基礎(chǔ)。方法：①軟件分析EphB4基因的mRNA結(jié)構(gòu)，篩選出擬干擾靶位點(diǎn)，構(gòu)建EphB4基因的干擾質(zhì)粒pSIREN．RetroQ．ZsGreen．EphB4
4、和陰性對照質(zhì)粒pSIREN．RetroQ．ZsGreen-N，經(jīng)過測序鑒定后，提取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PANC．1細(xì)胞；②實(shí)驗(yàn)分成空白對照組、pSIREN．RetroQ．ZsGreen．EphB4組和pSIREN．RetroQ-ZsGreen-N組，進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)；③在重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后，用RT-PCR和Western．blot分別測定EphB4mRNA和EphB4蛋白的相對含量，觀察各重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PANC．1細(xì)胞后對EphB4基因表達(dá)的影響；④MTT測定細(xì)胞增殖能力；⑤劃痕遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果：
5、①測序鑒定證明重組質(zhì)粒pSIREN．RetroQ．ZsGreen．EphB4和pSIREN．RetroQ．ZsGreen-N構(gòu)建成功；②瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48h后，脂質(zhì)體+干擾質(zhì)粒組PANC．1細(xì)胞中EphB4mRNA的表達(dá)水平較空白組、脂質(zhì)體組、干擾質(zhì)粒組和脂質(zhì)體+對照質(zhì)粒組顯著下降(P<0．05)；空白組、脂質(zhì)體組、干擾質(zhì)粒組和脂質(zhì)體+對照質(zhì)粒組四組間比較，差異不明顯(P>0．05)；③Western．blot法測定發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體+干擾質(zhì)粒組PANC．1細(xì)胞中EphB4蛋白的表達(dá)水平較空白組和脂質(zhì)體+對照質(zhì)粒組顯著下
6、降(P<0．05)；空白組和脂質(zhì)體+對照質(zhì)粒組兩組間比較，差異不明顯(P>0．05)；④抑制EphB4基因的表達(dá)使PANC．1細(xì)胞的增殖能力有所減弱，細(xì)胞的遷移能力與對照組比較有所下降。結(jié)論：成功構(gòu)建靶向EphB4的siRNA真核表達(dá)載體并有效轉(zhuǎn)染胰腺癌PANC．1細(xì)胞。干擾質(zhì)粒能有效地抑制胰腺癌PANC．1細(xì)胞EphB4基因的mRNA和蛋白表達(dá)，同時(shí)PANC．1細(xì)胞的體外增殖和遷移能力明顯下降。關(guān)鍵詞：胰腺癌PANC一1EphB4RNA干擾2TheinfluenceofRNAinterferencesupp
7、ressionEphB4expressionforthePANC—-1cellsofpancreaticcancerMasterdegreecandidate：LiBinSupervisor：ProfessorZhaoZuoweiMajor：SurgeryAbstraetObieetive：Pancreaticcancerisahigldymalignanttumorofdigestivesystem，anditisseriouslyharmtohuman’Slifeandhealth．Becauseofit
8、shiddendiseaseandrapidprogress，theeffectoftraditionaltreatmentisnotsatisfactory．Itstreatmentisverydifficultandprognosisisverypoor，SOitisveryimportanttodevelopedanewmethodofdiagnosisandtreatmentofpancre
