生物的選修三-基因地地工程

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1、實用標準文案基因工程一．DNA連接酶和DNA聚合酶的比較：?。┏煞郑旱鞍踪|(zhì)2）作用部位：催化形成磷酸二脂鍵（即核苷酸與核苷酸之間）3）作用過程：DNA聚合酶：將單個脫氧核苷酸連接成DNA長鏈DNA連接酶：將DNA片段的末端（粘性和平末端）4）作用結果：DNA連接酶：將存在的DNA片段連接成重組DNA，不需要模板DNA聚合酶：以一條DNA鏈為模板，形成新的DNA分子二．DNA重組的基本工具：1）限制性核酸內(nèi)切酶：簡稱限制酶。主要是從原核細胞中純化出來的。能夠特異性識別雙鏈DNA分子的某種特定序列（如：EcoRⅠ識別GAATTC序列，切出粘性末端。SmaⅠ特異性識別CCCGGG序列，切出

2、平末端）并且能使每一條鏈的特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，大多數(shù)限制酶識別序列由6個核苷酸組成。2）DNA連接酶：根據(jù)酶的來源不同，把酶分為兩類：一種是大腸桿菌分離出的E`coliDNA連接酶（恢復粘性末端），另一種是從T4噬菌體分離出的T4DNA連接酶（既可以連接平末端又可以連接粘性末端，連接平末端的效率較低）精彩文檔實用標準文案3）載體：質(zhì)粒是常用的載體，質(zhì)粒是一種裸露的，結構簡單，獨立于細菌擬核之外，并具有自我復制能力的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒的DNA分子上有很多限制酶切割位點，供外源DNA插入其中。質(zhì)粒DNA分子上有獨特的標記基因（如：四環(huán)素抗性基因，氨芐

3、青霉素抗性基因等，供重組DNA的鑒定和選擇）在基因工程中使用的運載體除質(zhì)粒外，還有λ噬菌體的衍生物，動植物病毒等。三,基因工程的基本操作程序：1）獲取目的基因：目的基因即編碼蛋白質(zhì)的基因（人工合成法：以目的基因轉(zhuǎn)錄成的mRNA為模版合成雙鏈DNA的方法和根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測出相應結構基因的核苷酸序列和從自然界已有的物種中分離出來）§基因文庫：將含有某種生物的不同基因的許多DNA片段，導入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因?！?.包含一種生物所有的基因的基因文庫叫做基因組文庫?！?.只包含了一種生物的的一部分基因，這種基因文庫叫部分基因文庫?！?通過

4、用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄所產(chǎn)生的DNA§可以根據(jù)基因的核苷酸序列，基因的功能，基因在染色體上的位置，基因轉(zhuǎn)錄的mRNA，以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性獲取目的基因2）構建表達載體：基因工程的核心№1.目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用№精彩文檔實用標準文案2組成：啟動子（一段特殊的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結合的部位，有它才能轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)）終止子（一段特殊的DNA片段，位于基因的末端，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來）標記基因（為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，

5、從而使含有目的基因的細胞篩選出來）3.將目的基因?qū)胧荏w細胞：§目的基因?qū)胧荏w細胞，并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程，叫做轉(zhuǎn)化§將目的基因?qū)胫参锛毎骸?.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：農(nóng)桿菌在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物（當植物受傷時，傷口處的細胞會分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細胞，這時農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA（可轉(zhuǎn)移DNA）轉(zhuǎn)移到受體細胞，并整合到受體細胞的染色體的DNA上，這種方法比較經(jīng)濟有效）№2.基因槍法（將包裹在金屬顆粒表面的DNA打入受體細胞中，使基因與其整合。）№3.花粉管通道法（在植物授粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，減去柱頭，然后滴加含目的基因的

6、DNA，使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞。是一種簡單經(jīng)濟的方法）§將目的基因?qū)雱游锛毎@微注射法：轉(zhuǎn)基因動物中采用的最多，也是最有效的一種將目的基因?qū)雱游锛毎姆椒ǎ▽⒑心康幕虻谋磉_載體提純，使DNA濃度保持在1—3微克＼毫升，然后從雌性動物體內(nèi)取出卵【可在體內(nèi)受精，也可在體外受精】采用顯微注射儀精彩文檔實用標準文案進行顯微注射，再將注射了目的基因的受精卵，經(jīng)胚胎早期培養(yǎng)一段時間再移植到雌性動物的輸卵管或子宮內(nèi)）§將目的基因?qū)胛⑸锛毎?.原核細胞的特點：繁殖快，多為單細胞，遺傳物質(zhì)較少等,早期的基因工程都用原核生物做受體細胞?！?.大腸桿菌細胞最常用的轉(zhuǎn)化方法：首先

7、用鈣離子處理細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境DNA分子的生理狀態(tài)（即感受態(tài)，處于這個狀態(tài)的細胞叫感受態(tài)細胞）再在一定溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。4.目的基因的檢測與鑒定§目的基因?qū)胧荏w細胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性，只有通過鑒定才知道?！?.檢測DNA是否插入了目的基因：采用DNA分子雜交技術，即將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，