基因地地工程1

《基因地地工程1》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案第七章基因芯片技術(shù)生物芯片：是指通過(guò)機(jī)器人自動(dòng)印跡或光引導(dǎo)化學(xué)合成技術(shù)在硅片、玻璃、凝膠或尼龍膜上制造的生物分子陣列，根據(jù)分子間的特異性相互作用的原理，將生命科學(xué)領(lǐng)域中不連續(xù)的分析過(guò)程集成于芯片表面，以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因以其他生物組分的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)?；蛐酒河址QDNA芯片或DNA陣列，是生物芯片的一種類型，它是將DNA分子固定于支持物上，并與標(biāo)記的樣品雜交，通過(guò)自動(dòng)化儀器檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)判斷樣品中靶分子的數(shù)量，進(jìn)而得知樣品中的mRNA的表達(dá)量，也可進(jìn)行基因突變體的檢測(cè)和

2、基因序列的測(cè)定，為進(jìn)一步了解基因間的相互關(guān)系及基因克隆提供有用的工具。生物芯片分類：l按載體材料分類：玻璃芯片、硅芯片、陶瓷芯片l按點(diǎn)樣方式分類：原位合成芯片、微矩陣芯片、電定位芯片l按芯片固定的生物分子類型分類：基因芯片或DNA芯片、蛋白質(zhì)芯片、芯片實(shí)驗(yàn)室。l按芯片使用功能分類：測(cè)序芯片、表達(dá)譜芯片、基因差異表達(dá)分析芯片基因芯片技術(shù)：是將大量探針?lè)肿庸潭ㄓ谥С治锷?，根?jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)度及分布進(jìn)而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。生物芯片的制作方法：接觸點(diǎn)樣法、

3、噴墨法、光刻DNA合成法。第八章PCR技術(shù)及其應(yīng)用1、如何理解PCR擴(kuò)增的原理和過(guò)程？答：①變性：通過(guò)加熱使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，雙鏈解離形成單鏈DNA。②退火：當(dāng)溫度突然降低時(shí)由于模板分子結(jié)構(gòu)較引物要復(fù)雜得多，而且反應(yīng)體系中引物DNA量大大多于模板DNA，使引物和其互補(bǔ)的模板在局部形成雜交鏈，而模板DNA雙鏈之間到互補(bǔ)的機(jī)會(huì)較少。③延伸：在DNA聚合酶和4種脫氧核糖核苷酸底物及Mg2+存在條件下，5`→3`的聚合酶催化以引物為起點(diǎn)的DNA鏈延伸反應(yīng)。④以上3步為一個(gè)循環(huán)，每一循環(huán)的產(chǎn)物可以作為下一個(gè)循環(huán)

4、的模板，數(shù)小時(shí)后,介于兩個(gè)引物之間的特異性DNA片段得到了大量復(fù)制，數(shù)量可達(dá)2×106-7拷貝。2、通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增已知序列側(cè)翼的未知序列的關(guān)鍵問(wèn)題是什么？用PCR作染色體步查有何特點(diǎn)？答：通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增已知序列側(cè)翼的未知序列的關(guān)鍵問(wèn)題是對(duì)目的序列只有一端是已知的，如何提供或設(shè)計(jì)PCR需要的另一個(gè)引物。用PCR作染色體步查的特點(diǎn)：比較簡(jiǎn)便，適合于小片段步查。3、PCR產(chǎn)物的克隆與一般的DNA片段的克隆有何異同點(diǎn)？答：相同點(diǎn)：①原理相同，都是利用堿基互補(bǔ)配對(duì)原則；②都是半保留復(fù)制；③都需要引物；④都是利

5、用4種dNTP合成新的DNA；⑤都需要多種酶的參與。不同點(diǎn)：①前者在體外進(jìn)行，后者在體內(nèi)進(jìn)行；②聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）不會(huì)產(chǎn)生岡崎片段；③DNA片段的克隆只有在細(xì)胞有絲、減數(shù)分裂的時(shí)候進(jìn)行DNA復(fù)制，而PCR可反復(fù)進(jìn)行。④細(xì)胞中的DNA復(fù)制受到許多復(fù)雜的因子的調(diào)控⑤兩者進(jìn)行的程度不同。4、為什么在定量PCR中要引入Ct值的概念？答：Ct值與起始模板拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系。起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝

6、數(shù)。精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案第九章DNA序列分析1、簡(jiǎn)述化學(xué)降解法測(cè)序的基本原理以及主要應(yīng)用范圍。答：基本原理：將待測(cè)DNA片段的5’端磷酸基團(tuán)作放射性標(biāo)記，再分別采用不同的化學(xué)方法對(duì)特定堿基進(jìn)行化學(xué)修飾并在該位置打斷核酸鏈，從而產(chǎn)生一系列5’端被標(biāo)記的長(zhǎng)度不一且分別以不同堿基結(jié)尾的DNA片段，這些以特定堿基結(jié)尾的片段群通過(guò)并列點(diǎn)樣的方式用凝膠電泳進(jìn)行分離，再經(jīng)放射自顯影，即可讀出目的基因DNA的堿基序列。其核心原理在于特定化學(xué)試劑可對(duì)不同堿基進(jìn)行特異性修飾并在被修飾的堿基處（5’或3’）打斷磷酸二酯鍵，從而達(dá)

7、到識(shí)別不同堿基種類的目的。2、簡(jiǎn)述將Sanger的測(cè)序方法稱為雙脫氧鏈終止法的理由。答：理由：Sanger的測(cè)序方法巧妙地使用了雙脫氧核苷酸的特性。雙脫氧核苷酸分子的脫氧核糖的3’位置的羥基（—OH）缺失，當(dāng)它與其他正常核苷酸混合在同一個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)體系中時(shí)，在DNA聚合酶的作用下，雖然它也能夠像正常核苷酸一樣參與DNA合成，以其5’位置的磷酸基團(tuán)與上位脫氧核苷酸的3’位置的羥基結(jié)合，但是，由于它自身3’位置的羥基缺失，致使下位核苷酸的5’磷酸基無(wú)法與之結(jié)合，從而使DNA的合成就到此終止，通過(guò)放射自顯影，就可讀

8、出堿基排列順序，則Sanger的測(cè)序方法也可稱為雙脫氧鏈終止法3、采用循環(huán)測(cè)序法測(cè)序時(shí)引物的設(shè)計(jì)有什么要求？為什么？答：要求：a)長(zhǎng)度為18~22個(gè)堿基；b)盡量避免3個(gè)以上相同堿基的重復(fù)，尤其是G或C；c)Tm值約為55~60℃（至少要高于45℃）；d)盡量減少發(fā)夾結(jié)構(gòu)形成的可能性；e)引物之間不形成二聚體結(jié)構(gòu)。4、對(duì)于一段20kb未知序列的DNA片段，可采用什么策略測(cè)定其核苷酸序列？答：是通過(guò)引物指導(dǎo)未知序列