敲除小鼠常見問地的題目與回答

《敲除小鼠常見問地的題目與回答》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、實用標準文案敲除小鼠常見問題與回答一、什么是ES細胞顯微注射？答：胚胎干細胞顯微注射是制作基因敲除小鼠的一個最常用的方法。主要過程是將攜帶目的基因的胚胎干細胞注射到小鼠的囊胚腔中獲得嵌合體小鼠。所得嵌合體小鼠的組織，將同時含有來源于囊胚的細胞和胚胎干細胞。嵌合體小鼠必須和野生型小鼠配種以決定遺傳改變的生殖系能否傳遞，這樣可能獲得轉(zhuǎn)基因或打靶基因（來源于胚胎干細胞）穩(wěn)定的生殖系傳遞的小鼠。一般情況下，大約能獲得50%繼承了目的基因的后代。二、嵌合體遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現(xiàn)的個體。免疫學上的涵義則指一個機體身上有兩種或兩

2、種以上染色體組成不同的細胞系同時存在,彼此能夠耐受,不產(chǎn)生排斥反應,相互間處在嵌合狀態(tài)。在基因敲除鼠中指通過向囊胚注射被外源基因轉(zhuǎn)化了的胚胎干細胞，使得發(fā)育成為的個體中含有不同基因型的細胞，產(chǎn)生的個體也叫嵌合體，即該生物體中嵌合了兩種不同遺傳結(jié)構(gòu)的細胞（一種是基因型被改變了的細胞，另一種是原來的基因型的細胞）。三、條件性敲除的原理？答：Cre-LoxP系統(tǒng)是源于P1噬菌體的一個DNA重組體系,由Cre酶和相應的LoxP位點組成,它能導致重組發(fā)生在特定的DNA序列處(LoxP位點),該系統(tǒng)可以將外源基因定點整合到染色體上或?qū)⑻囟―NA

3、片段刪除?；贑re-LoxP的基因打靶要分兩步來進行。首先要在胚胎干細胞的基因組中引入LoxP序列，這一步可以通過打靶載體的設計和對同源重組子的篩選來實現(xiàn)。下一步通過Cre介導的重組來實現(xiàn)靶基因的遺傳修飾或改變。Cre-LoxP系統(tǒng)既可以在細胞水平上用Cre重組酶表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染中靶細胞，通過識別LoxP位點將抗性標記基因切除，又可以在個體水平上將重組雜合子小鼠與Cre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，篩選子代小鼠就可得到刪除外源標記基因的條件性敲除小鼠。四、如何鑒定和挑選嵌合體？答：動物只有部分組織細胞整合有外源基因，則稱為嵌合體動物。它的鑒定主要根

4、據(jù)毛色去鑒定。注射的ES和囊胚來源不同的小鼠品系。它們的毛色不同。因此可以根據(jù)毛色的嵌合率來鑒定和挑選嵌合體。精彩文檔實用標準文案五、ROSA26與定點插入？答：利用同源重組技術，把外面的cDNA片段或者其他DNA片段，定點插入到ROSA26位置。ROSA26是一個安全區(qū)域，外源性的基因定點插入這個位點不會影響其他基因的表達。常見問題1、你們是否接受打靶載體或者重組的胚胎干細胞之后的服務工作？目前公司主要提供基因敲除定制化的全程服務，同時也可以承擔打靶載體構(gòu)建、細胞轉(zhuǎn)染和顯微注射等服務項目。2、您公司的C57BL/6野生型胚胎干細胞

5、株是否可以出售？C57BL/6野生型胚胎干細胞株我們是不對外出售的。這個細胞株是我們自主研發(fā)并具有自主知識產(chǎn)權(quán)的細胞系。鑒于基因敲除工作的重要環(huán)節(jié)以及是否可以得到一個比較好的Germlinetransmission的關鍵就是是否有一個高質(zhì)量的EScellline，因此這個EScellline已經(jīng)成為我們公司的最核心的資產(chǎn)。所以，非常抱歉！我們不能對外出售，請您諒解！3、公司最后提供給客戶多少只F1代小鼠？有相關的檢測方法或檢測報告嗎？我們最后提供給客戶的是不少于兩只的F1雜合子小鼠。一般情況下，我們可以提供更多的F1代雜合子小鼠。我

6、們會有相關的檢測方法和最終的檢測報告提供給您，您也可以自己進行核實檢測！也可以在我們的幫助之下完成。4、客戶委托公司制備基因敲除小鼠需要提供哪些材料？客戶只需要告訴我們要操作的基因名字和您的特殊要求。對于沒有經(jīng)驗的客戶，我們會免費為您提供咨詢，了解您的需求，以及想得到的結(jié)果，為您提供最佳的設計方案。我們會對該基因進行序列分析后，給您一個初步的設計，雙方溝通沒有問題后，我們會簽署一份技術服務合同，然后我們進行BAC的訂購，開始模型的制備。直到您得到F1代小鼠。5、公司是否能提供大鼠的基因敲除服務？我們公司現(xiàn)在主要是提供各種基因敲除小鼠

7、模型的制備服務。有關基因敲除的大鼠模型，我們公司正在對技術進行研發(fā)和優(yōu)化。所以現(xiàn)在還不能為您提供基因敲除的大鼠，非常抱歉！請關注我們公司的網(wǎng)站。我們一旦開始提供大鼠基因敲除服務，我們將在公司網(wǎng)站上公布（估計在2013年）。6、公司提供基因敲進服務時，對敲進的基因有哪些要求？所能接受的最大分子量是多少？公司提供基因敲進服務時，對于特殊的基因，需要客戶提供cDNA信息，插入基因片段的大小一般在5K以下，效果比較好。對于5-10kb的，效率可能會低一些。對于大片段的敲進，由于重組效率將大大地降低，我們可能會收取較多的費用。精彩文檔實用標準

8、文案7、公司會安排多少個陽性克隆進行囊胚注射？我們通常在注射的時候會安排四個克隆，但是我們做陽性重組胚胎干細胞篩選的時候通常要求得到不少于6-8個克隆，以備篩選更好的注射克隆之用。而且，我們的最終目標是要得到優(yōu)良的Germ-linet