cst常見問地的題目與回答最新版faq

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1、實用標(biāo)準(zhǔn)文案CST常見問題與回答（最新版本）1、我該如何儲存我的抗體？多高的溫度會影響抗體的穩(wěn)定性？答：請將抗體的原始管儲存到-20°C，不要分裝，否則有可能引起抗體的改變和浪費。提供的抗體貯存在包含50%甘油緩沖液中，在推薦的儲存溫度下不會冷凍。這避免了由于反復(fù)凍融導(dǎo)致的抗體降解。偶聯(lián)抗體可能儲存在4°C，請參照產(chǎn)品說明書上的建議儲存。2、如何儲存SDS裂解的磷酸化蛋白樣本？答：如果短期內(nèi)使用(少于3個月)，SDS樣本細(xì)胞裂解液可以儲存在-20℃，如果長期儲存，應(yīng)保存于-80℃。活化的蛋白樣本的降解變

2、化很大，其降解率取決于每種蛋白的性質(zhì)和樣本里究竟含有多少活化的蛋白。3、能用室溫孵育抗體1小時代替4℃過夜嗎？答：不建議。CST公司活化特異的抗體用于區(qū)分一或兩個翻譯后修飾的氨基酸殘基。這些修飾包括磷酸化，乙?；兔盖懈?。與識別總蛋白的抗體相比，大多數(shù)針對這些修飾位點的抗體具有較低的親和性。因此，通過4℃孵育過夜延長抗原和抗體的反應(yīng)時間以獲得最好的信噪比是非常關(guān)鍵的。4、當(dāng)我準(zhǔn)備細(xì)胞裂解液樣品時，需使用什么緩沖液？答：請檢查每個產(chǎn)品說明書中包含的Westernblot操作步驟中推薦的緩沖液。CST提供以

3、下緩沖液(見下表)，或者，如果你想自己配制，CST網(wǎng)站上列出了特別的緩沖液組分。CHAPS緩沖液專為獲得細(xì)胞質(zhì)的提取物而設(shè)計，適應(yīng)于Caspase的檢測，但并非關(guān)鍵。樣本處理推薦使用緩沖液全細(xì)胞裂解物，使用標(biāo)準(zhǔn)的SDS-PAGE上樣緩沖液#7722或#7723藍(lán)色的上樣緩沖液包裝#7722或紅色的上樣緩沖液包裝#7723免疫沉淀和/或激酶分析，使用#9803細(xì)胞裂解緩沖液(10X)#9803切割的半胱天冬酶和其底物的免疫印跡，使用#9852CHAPS緩沖液(10X)#98525、CST的抗體是否適用于全

4、組織樣本裂解物？答：CST并未測試所有抗體是否適用于全組織樣本裂解物，但是CST精彩文檔實用標(biāo)準(zhǔn)文案的很多抗體已經(jīng)被其他客戶用于整個組織而且取得巨大成功。優(yōu)寧維微信公眾號：優(yōu)寧維抗體專家/UNIVSUBC6、如何為磷酸化目標(biāo)蛋白準(zhǔn)備陽性細(xì)胞裂解液對照？答：請參考CST網(wǎng)站上該產(chǎn)品的Westernblot圖，使用圖述的細(xì)胞系和藥物處理，能夠得到陽性對照蛋白。也可參見：www.cellsignal.com/support/controls.html查閱7、假如說明書上某個種屬未被列出與CST抗體有交叉反應(yīng)，

5、是否意味著這個種屬未被檢測過呢？答：可能未被檢測過。CST科學(xué)家檢測所有CST抗體在多個物種的交叉反應(yīng)性，如果可能的話（這個依賴于目標(biāo)蛋白和實驗系統(tǒng)的可行性）。假如我們沒有獲得某個種屬的交叉反應(yīng)的陽性結(jié)果，我們就不會列出這個種屬。然而，有可能我們檢測的這個細(xì)胞系包含一個低水平的特定蛋白，或者，我們使用的誘導(dǎo)條件對那個特定的細(xì)胞系不起作用。如果您需要針對某個種屬交叉反應(yīng)的更多信息，請隨時聯(lián)系我們的技術(shù)支持團隊support@cellsignal.com或者優(yōu)寧維公司來獲取幫助。8、使用CST抗體時，為什么

6、我不能使用我們自己實驗室的免疫印跡操作流程？答：CST?抗體經(jīng)過優(yōu)化以提供最強的信號，最少的背景，使用CST推薦的免疫印跡操作流程，對于終端客戶的優(yōu)點是節(jié)約時間和材料。9、如何確保Westernblot結(jié)果的可重復(fù)性？答：至于為什么看起來較難重復(fù)Westernblot結(jié)果，這里有幾種可能性。要發(fā)現(xiàn)這種情況的原因，可考慮以下：9-1）你是如何儲存抗體的？請參考問題1，2?？贵w稀釋后不能重復(fù)使用。許多抗體有一個非常低的工作濃度，很可能這個濃度隨著連續(xù)的Westernblot會減少。9-2）你確定你的樣本中包

7、含活化的蛋白？細(xì)胞裂解液樣品制備活化蛋白會由于細(xì)胞數(shù)量，藥物誘導(dǎo)時間，細(xì)胞傳代數(shù)量和儲存條件不同而改變。CST產(chǎn)品在其保質(zhì)期內(nèi)都有最佳表現(xiàn)。請訪問www.cellsignal.com/support/shelflife.html產(chǎn)品保質(zhì)期頁面獲得列表。請注意：不能分裝抗體。10、如何使用固相抗體來做免疫沉淀？答：要得到最佳的結(jié)果，獲得均勻的微珠懸浮液是重要的。以下步驟可確保同質(zhì)：?將包含微珠懸浮液的管子放入冰桶10分鐘。?倒置管子幾次以獲得50%微珠-緩沖液懸浮液。?假如可能，溫和漩渦管子。?為了迅速吸

8、出產(chǎn)品，切掉吸管端頭，將吸管端頭插入微珠懸浮液使靠近固相抗體微珠混合物。孵育抗體和200μg的細(xì)胞裂解物(約1mg/ml)4℃過夜，用推薦的抗體稀釋濃度。精彩文檔實用標(biāo)準(zhǔn)文案11、當(dāng)有多種抗體可以選擇時，哪一種在我的實驗中表現(xiàn)最優(yōu)？答：通常，CST會針對一個目標(biāo)蛋白提供多個抗體。選擇在您接下來的實驗中表現(xiàn)最優(yōu)的抗體，可以訪問抗體對照表格或者聯(lián)系CST技術(shù)支持support@cellsignal.com或優(yōu)寧維公司來獲取幫助，進而選擇最適合您