河北道地藥材色譜指紋圖譜研究論

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1、河北道地藥材色譜指紋圖譜研究范麗芳?【摘要】：第一部分河北道地藥材紫菀指紋圖譜研究紫菀為雙子葉菊科植物紫菀(AstertataricusL.f.)的干燥根及根莖。具有潤肺下氣,消痰止咳的功效。紫菀中含有的三萜類成分(紫菀酮、木栓酮、表木栓醇等)為發(fā)揮藥效的主要物質(zhì),且紫菀酮為其祛痰的有效成分之一。河北省為紫菀藥材的主要產(chǎn)區(qū),安國產(chǎn)紫菀藥材素有“祁紫菀”之稱。由于受地理因素和生長環(huán)境的影響,不同產(chǎn)區(qū)紫菀的化學(xué)成分及其含量不盡相同,紫菀酮的含量隨地區(qū)的不同差異很大。目的:建立河北道地藥材紫菀的HPLC指紋圖譜,得到對照圖譜,并與不同產(chǎn)

2、地紫菀藥材指紋特征相比較,計算相似度;并對其有效成分紫菀酮進行含量測定,為科學(xué)評價與有效控制紫菀藥材質(zhì)量提供新方法。方法:1指紋圖譜研究(1)提取:比較了不同提取溶劑、不同提取方法及不同提取時間的提取效果,選擇提取成分較多,提取率較高的提取條件。(2)色譜條件:選用合適的色譜柱、檢測器及檢測波長,調(diào)整流動相的組成、配比、流速,調(diào)節(jié)柱溫,使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。(3)系統(tǒng)適用性試驗:在已確定的色譜條件下,考察指紋圖譜中紫菀酮色譜峰的分離度和理論板數(shù)。(4)精密度試驗:制備樣品溶液1份,重復(fù)進樣6次,記錄保留時間和峰面積。(5

3、)重復(fù)性試驗:平行制備樣品溶液6份,分別進樣,記錄保留時間和峰面積。(6)穩(wěn)定性試驗:制備樣品溶液1份,分別于0,2,4,6,8,12,24h進樣,記錄保留時間和峰面積。(7)指紋圖譜的建立:分別取道地紫菀藥材10批,其他不同產(chǎn)地的紫菀樣品7批,制備樣品溶液,進行指紋圖譜分析、相似度評價。2紫菀酮的含量測定(1)提取:同指紋圖譜項下。(2)色譜條件:在指紋圖譜色譜條件的基礎(chǔ)上,改變流動相配比,使待測物峰在較短的時間內(nèi)達到較好的分離。(3)系統(tǒng)適用性試驗:在以上色譜條件下,對樣品溶液進行HPLC檢測,記錄紫菀酮色譜峰的理論板數(shù)和分離

4、度。(4)標準曲線的制備:配制系列濃度的紫菀酮對照品溶液,分別進樣,記錄峰面積;以紫菀酮的濃度為縱坐標,相應(yīng)的峰面積為橫坐標,繪制標準曲線。(5)精密度試驗:制備樣品溶液1份,重復(fù)進樣6次,記錄峰面積。(6)重復(fù)性試驗:取同一批藥材,平行制備樣品溶液6份,分別進樣,記錄峰面積。(7)穩(wěn)定性試驗:制備樣品溶液1份,分別于0,2,4,6,8,12,24h進樣,記錄峰面積。(8)回收率試驗:取已知紫菀酮含量的紫菀藥材適量(約含紫菀酮為含量項下的50%)6份,分別加入適量的紫菀酮對照品溶液,平行制備同一濃度的樣品,測定紫菀酮的含量。(9)

5、檢測限的確定:將紫菀酮對照品溶液逐步稀釋,信噪比S/N≥3時的進樣量確定為檢測限。(10)樣品測定:在已確定的色譜條件下,測定17批紫菀藥材中紫菀酮的含量。結(jié)果:1指紋圖譜研究(1)提取:甲醇超聲提取20min,重復(fù)性好,提取效率高。(2)色譜條件:色譜柱為DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.05%磷酸為流動相進行梯度洗脫,流速為1.0mL/min,柱溫為30?C,檢測波長為200nm,進樣體積為20μL。(3)系統(tǒng)適用性試驗:在以上色譜條件下,紫菀酮的保留時間約為84min,按紫菀酮色譜峰

6、計算理論板數(shù)約為3.0×103,與其他色譜峰的分離度大于1.5。(4)精密度試驗:以紫菀酮為內(nèi)參照峰,計算各主要色譜峰相對保留時間和相對峰面積比值的RSD分別為0.11%～1.3%和0.18%～1.5%;利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版軟件計算,相似度均大于0.9,說明精密度良好。(5)重復(fù)性試驗:各主要色譜峰相對保留時間和相對峰面積比值的RSD分別為0.12%～1.1%和0.31%～2.9%,相似度均大于0.9,說明重復(fù)性良好。(6)穩(wěn)定性試驗:各主要色譜峰相對保留時間和相對峰面積比值的RSD值分別為0.19%～1

7、.7%和0.29%～2.1%,相似度均大于0.9,說明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。(7)指紋圖譜的建立:得到10批道地紫菀藥材的指紋圖譜及其20個共有峰,同時得到不同來源紫菀藥材的指紋圖譜。(8)數(shù)據(jù)分析:運用相似度評價系統(tǒng)2004A版軟件計算,10批河北道地藥材相似度均在0.95以上,批間差異較小,春秋兩季采收無明顯差異。但不同產(chǎn)地的藥材與河北道地藥材生成的對照指紋圖譜相比,相似度相差較大。2紫菀酮的含量測定(1)提取:同指紋圖譜項下。(2)色譜條件:流動相為乙腈,流速為2.0mL/min,其他條件同指紋圖譜項下。(3)系統(tǒng)適用性試

8、驗:在以上色譜條件下,紫菀酮的理論板數(shù)為9.8×103,分離度大于1.5。(4)標準曲線的制備:紫菀酮濃度在0.099～0.895mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程分別為Y=2.500×10-3+9.800×10-8X,r=0.9996(n