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1、ABO疑難定型一、ABO疑難血型鑒定的方法 ?。ㄒ唬┱炊ㄐ停骸 ≌ㄐ停?A,-B,-AB,-H,-A1 反定型:Ac,Bc,Oc,自身對照 1. ABO正定型中各種試劑用途 疑難定型中正定型用抗血清 抗-A及抗-B 抗-AB:確認(rèn)弱A和弱B抗原,與弱A及弱B抗原親和力強(qiáng),會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng) 抗-H:用于檢查亞型及孟買型,A亞型紅細(xì)胞上的H抗原多于正常A型 抗-A1:用于A亞型(如A2,A3)檢測 2. H抗原在紅細(xì)胞上的分布 3. ABO反定型中各種試劑的用途 反定型中試劑紅細(xì)胞的意義 A及B細(xì)胞:確認(rèn)抗-A或抗-
2、B抗體 O型紅細(xì)胞:檢查是否存在ABO系統(tǒng)以外抗體干擾ABO反定型 自身對照:用于確認(rèn)正反定型結(jié)果的有效性,排除自身抗體對定型的干擾(如冷凝集等) A2細(xì)胞:用于亞型的鑒定,尤其是在懷疑是A亞型且又存在抗-A1抗體的情況下 (二)型物質(zhì)測定 型物質(zhì)準(zhǔn)備:1~2ml唾液,沸水煮10分鐘,離心后得到的上清?! ?biāo)清的調(diào)制:標(biāo)清用鹽水稀釋至其效價(jià)為1:16 中和:將0.5ml型物質(zhì)與調(diào)制后的標(biāo)清0.5ml等體積混合,室溫放置30分鐘 檢測:用Ac檢測中和后的抗-A,Bc檢測中和后的抗-B. 結(jié)果判斷:如果抗-A被中和,則被檢者為A型,如果抗-B被中
3、和,則被檢者為B型?! 。ㄈ┪辗派ⅰ ∥沼肦BC:鹽水洗滌5次的被檢者壓積RBC1ml?! ∥沼玫臉?biāo)準(zhǔn)血清 將壓積RBC和標(biāo)清按等體積比例混合,在相應(yīng)的溫度條件下(4℃)孵育1小時(shí),每隔15分鐘混勻一次 用鹽水洗滌孵育后的細(xì)胞6次,得到壓積RBC,加入等量鹽水。 56℃水浴震蕩10分鐘,離心獲得上清即為放散液?! ∮脴?biāo)準(zhǔn)試劑紅細(xì)胞檢測放散液。 ?。ㄋ模㎡型篩選紅細(xì)胞的應(yīng)用 抗原組成:三組合細(xì)胞,要求必須具備全部的Rh因子 I:O型R1R1(CDe/CDe);II:O型R2R2(cDE/cDE);III:O型rr(cde/cde) 用途:用于受血者、獻(xiàn)
4、血員及孕產(chǎn)婦等的ABO系統(tǒng)以外不規(guī)則抗體的篩選 目的:在配血之前,有針對性、按比例的去尋找與帶有抗體的病人相配合的血 ?。ㄎ澹┳约依淠獦拥腁BO定型 正定型用紅細(xì)胞的準(zhǔn)備: 血樣采集后,立即離心,獲得壓積紅細(xì)胞 用37℃溫鹽水洗滌紅細(xì)胞 45℃熱放散3分鐘 巰基試劑處理:破壞IgM抗體 自家冷凝集血樣的ABO定型 反定型用血漿或血清的準(zhǔn)備 血樣采集后放置4℃冰箱靜置24小時(shí),使紅細(xì)胞充分吸收自身冷凝集抗體 用自身紅細(xì)胞吸收去除自身冷抗體 用O型紅細(xì)胞吸收去除ABO系統(tǒng)以外的非特異性及特異性抗體 ?。┇@得性B 1. 獲得性B及多凝集現(xiàn)象
5、 獲得性B: 腸紊亂及感染病人,細(xì)菌酶影響A抗原的受體 腸內(nèi)壁通透性增加,而后細(xì)菌多糖吸附在紅細(xì)胞表面 多凝集現(xiàn)象:異?;蜃冃蔚腞BC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隱蔽受體多凝集血樣中的血清不與自身反應(yīng)) 2. 獲得性B產(chǎn)生的主要機(jī)理 二、ABO正反定型不符的問題分析 ?。ㄒ唬〢BO定型問題經(jīng)常發(fā)生的情況為: 1. 明顯缺失應(yīng)該出現(xiàn)的抗-A或抗-B: (1)新生兒血樣 (2)免疫缺陷、免疫紊亂 (3)前帶現(xiàn)象 (4)血型型物質(zhì)過多 (5)抗原太弱,常規(guī)方法檢查不出來,相應(yīng)血清中無抗體 (
6、6)亞型,反應(yīng)是混合視野 2. 由于試劑被污染,或試劑中有額外抗體 3. 明顯多出抗原(或多出抗體) (1)亞型,如A2型可能血清中有抗-A1 (2)自家凝集 (3)獲得性B (二)引起ABO正反定型不一致的原因分析 1. 技術(shù)因素: (1)試劑貯存不當(dāng) (2)使用技術(shù)錯(cuò)誤 (3)使用錯(cuò)誤的試劑 (4)使用污染或失效的試劑 (5)離心速度不當(dāng) 2. 存在IgM性質(zhì)的自家冷抗體 由于自家冷抗體(冷凝集病,CHD)而導(dǎo)致自家溶血的病人,在低于37℃時(shí)血細(xì)胞自發(fā)凝集,影響正反定型??捎肈TT或2-ME來處理細(xì)胞及
7、血清來解除此種IgM抗體引起的干擾。血清的反定型可在37℃進(jìn)行,用O型紅細(xì)胞作為對照。 3. 抗原表達(dá)弱或缺失: (1)A、B抗原的表達(dá)可在下述情況下被抑制: a.白血病 b.雙胞胎 c.H基因變異 (2)A、B抗原表達(dá)太弱:由于A、B抗原表達(dá)太弱,與抗-A或抗-B不反應(yīng),但確實(shí)存在A或B抗原,因此血清中無相應(yīng)的抗體?! ?. 高水平可溶性血型物質(zhì)的病人: 極少數(shù)有卵巢囊腫的婦女,由于含高濃度的可溶性血型物質(zhì),使抗原減弱或消失,此血型物質(zhì)分泌進(jìn)入血液可以中和抗-A或抗-B。當(dāng)使用未洗滌的RB