promega雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)

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1、為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃promega雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)　　雙熒光報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)簡(jiǎn)明操作步驟　　試劑準(zhǔn)備：　　磷酸鹽緩沖液(PBS)　　PBS緩沖液，10X(每升)　　Na2HPO4　　2gKH2PO4　　80gNaCl　　2gKCl　　溶于1升無(wú)菌去離子水中。1XPBS的pH應(yīng)為　　1.制備被動(dòng)裂解緩沖液1×PLB：將1倍體積的5×PassiveLysisBuffer(PLB)加到4倍體積的蒸餾水中。混合均勻。儲(chǔ)存在4℃。

2、建議每次使用前配制新鮮的1XPLB。5XPLB應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃?！　?．LARⅡ：用LuciferaseAssayBufferⅡ溶解凍干粉LuciferaseAssaySubstrate。存于-20℃或-70℃?！　?．Stop&Glo試劑：　　a.取50×Stop&Glo?Substrate加到105ml的Stop&Glo?Buffer。在提供的棕色Stop&Glo?Reagent瓶中，振搖10秒。在-20℃存15天。目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專(zhuān)業(yè)水平，

3、并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　b.若配制少量的1×Stop&Glo?Reagent：將一定量的50×Stop&Glo?Substrate加入到所需要量的Stop&Glo?Buffer中，使終濃度成為1倍濃度?！　〖?xì)胞裂解　　1．除去培養(yǎng)細(xì)胞中的培養(yǎng)基?！　?．用1×PBS清洗培養(yǎng)細(xì)胞。去掉清洗液?！　?．按推薦體積將1×PLB加入到培養(yǎng)孔中?！　〉?步中使用的1×PLB體積　　被動(dòng)裂解主動(dòng)裂解　　培養(yǎng)板1

4、×PLB平板大小1×PLB　　6孔500ul100×200mm1ml　　12孔250ul60×15mm400ul　　24孔100ul35×12mm200ul　　48孔65ul6孔250ul　　96孔20ul12孔100ul　　4．被動(dòng)裂解：在室溫輕緩晃動(dòng)培養(yǎng)板15分鐘，把裂解液　　轉(zhuǎn)移到檢測(cè)試管中?！　〗Y(jié)果檢測(cè)　　a.檢測(cè)96孔板中的樣品：　　開(kāi)始之前：目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專(zhuān)業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保

5、新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣器1和2分別分裝100ul的LARII和Stop&Glo?試劑?！　y(cè)量時(shí)，使用1-2秒延遲和5-10秒讀數(shù)。之內(nèi)）　　1、加入≤20ulPLB裂解液/孔　　2、加入100ulLARII　　3、檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶　　4、加入100ulStop&Glo?試劑　　5、檢測(cè)海腎螢光素酶的活性　　6、其它孔如此循環(huán)操作。　　b.用手動(dòng)或配有單自動(dòng)進(jìn)樣器的螢光發(fā)光儀進(jìn)行檢測(cè)：　　1、事先在檢測(cè)管中加入100ulLARII　　2、轉(zhuǎn)移20ul

6、PLB裂解液到檢測(cè)管中，混合?！　?、檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶的活性　　4、向檢測(cè)管中加入100ulStop&Glo?Reagent　　5、檢測(cè)海腎螢光素酶活性　　雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒構(gòu)建　　基因3’UTR的克隆，　　表Slug基因3’UTR基因克隆及結(jié)合區(qū)突變引物：引物名稱(chēng)　　Slug-3’UTR-PF　　Slug-3’UTR-PR　　Slug-mut-PF目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專(zhuān)業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安

7、保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　Slug-mut-PR：引物序列5-TCGACCGGTTGAGTGACGCAATCAATGTTTACTCGAAC5--GGACTAGTCAAACAATTCTTTGTACAGTGGTTTGGTAC5-GATTAGTCCTGAACATCCATGGCGCATGCTCCATTGTCTTAC5-ATGGATGTTCAGGACTAATCTTTCCCTCCTCCCCCAAGGCAC上游酶切位點(diǎn)為AgeI，下游為平末端?！　≥d體信息　　HinNotHinS

8、acHinSacBglHinI(1711)　　I(1717)　　II(1749)　　II(1815)　　II(1856)　　I(1874)　　dIII(1914)　　I(2291)　　啟動(dòng)子活性分析　　一、　　二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模悍治鰡?dòng)子活性實(shí)驗(yàn)原理：熒光素酶報(bào)告基因的活性用Dual-Luciferase?ReporterAssay　　System