標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代程序

標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代程序

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1、上海11制藥有限公司標(biāo)題文件號碼:SMB-004發(fā)行日期:標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代程序版本號碼:3第10頁:共10頁1.0目的Purpose標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代有一個(gè)比較規(guī)范的程序。2.0范圍Scope上海11制藥有限公司內(nèi)的微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代。3.0適用文件ApplicableDocument(s)大腸桿菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔ChP法〕SMB-102銅綠假單胞菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔ChP法〕SMB-103金黃色葡萄球菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔ChP法〕SMB-104沙門菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔ChP法〕SMB-105大腸桿菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔JP法〕SMB-112銅綠假單胞菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔

2、JP法〕SMB-113金黃色葡萄球菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔JP法〕SMB-114沙門菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔JP法〕SMB-115大腸菌群檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔Sankyo法〕SMB-122銅綠假單胞菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔Sankyo法〕SMB-123金黃色葡萄球菌檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔Sankyo法〕SMB-124革蘭氏染色標(biāo)準(zhǔn)操作程序SMB-001培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗(yàn)SMB-011培養(yǎng)基配制與管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序SMB-0074.0相關(guān)部門ResponsibleSection(s)質(zhì)量管理部FD-002/0上海11制藥有限公司標(biāo)題文件號碼:SMB-004發(fā)行日期:標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代程序版本號碼:3第10頁:共1

3、0頁5.0物件準(zhǔn)備5.1設(shè)備與儀器接種環(huán),生物安全柜,-80℃冷凍冰箱,恒溫培養(yǎng)箱,高壓蒸汽滅菌器,5℃冰箱,1ml菌種冷凍管,放菌種冷凍管的盒子,塑封袋,標(biāo)明菌種名稱、接種日期及接種人的標(biāo)簽紙,1ml加樣槍,燒杯,試管及配套硅膠塞,顯微鏡、水浴鍋5.2試劑及菌種大腸桿菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌、黑曲酶菌、10%甘油,滅菌生理鹽水,革蘭氏染色液、0.1%亞甲藍(lán)液(注:本公司購入的菌種標(biāo)準(zhǔn)分為ATCC和CMCC兩種)5.3培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、酵母霉菌瓊脂培養(yǎng)基6.0操作步驟6.110%甘油的制

4、備:將甘油配制成10%濃度的溶液,然后用1ml加樣槍,將10%的甘油溶液加到1ml菌種冷凍管中,蓋上菌種冷凍管蓋子,但不能將蓋子擰緊。再將蓋上蓋子的菌種冷凍管放入燒杯內(nèi)進(jìn)行121℃、30分鐘高壓蒸汽滅菌。滅菌結(jié)束后,將燒杯中的菌種冷凍管放入生物安全柜內(nèi),擰緊蓋子放入放菌種冷凍管的盒子內(nèi),再將盒子放入5℃冰箱保存,備用。6.2標(biāo)準(zhǔn)菌種制備與管理6.2.1標(biāo)準(zhǔn)菌種冷凍管的制備(第一代)將新購入的標(biāo)準(zhǔn)菌種在24小時(shí)內(nèi)移入以上制備好的10%滅菌甘油內(nèi)。即從5℃冰箱取出已準(zhǔn)備好的10%滅菌甘油菌種冷凍管置于生物安全柜內(nèi),用冷卻滅菌接種環(huán)從標(biāo)準(zhǔn)菌種斜面上挑取1~2個(gè)菌落接FD-002/0上海11制藥有限

5、公司標(biāo)題文件號碼:SMB-004發(fā)行日期:標(biāo)準(zhǔn)菌種的管理與傳代程序版本號碼:3第10頁:共10頁種至10%的滅菌甘油菌種冷凍管中,制成108的菌懸液,擰緊菌種冷凍管的蓋子放入相配套的塑封袋中,同時(shí)放入該菌的標(biāo)簽紙,再將放有同一種菌的小的塑封袋放入一個(gè)較大的塑封袋中,放入-80℃帶鎖的冰箱內(nèi)。一般標(biāo)準(zhǔn)菌種在超低溫冰箱內(nèi)能保存5年,平均每年每種菌用4支冷凍管,每三個(gè)月用一支冷凍管。6.2.2第二、三代工作菌種的制備:6.2.2.1從超低溫冰箱中取出所需的菌種冷凍管,置于35~40℃的水浴中進(jìn)行解凍1分鐘。6.2.2.2解凍后,放入生物安全柜內(nèi),用冷卻后的滅菌接種環(huán)從冷凍管中取一環(huán)菌液接種于10m

6、l滅菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置于35~37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)18~24小時(shí),進(jìn)行增菌培養(yǎng)。〔第二代〕6.2.2.3培養(yǎng)后,用冷卻的滅菌接種環(huán)從增菌液中沾取一環(huán)接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基斜面上貼上菌種標(biāo)簽,置于35~37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)18~24小時(shí),進(jìn)行培養(yǎng)?!沧ⅲ旱谌臃N出的斜面數(shù)量是根據(jù)該月的該菌種的用量進(jìn)行接種。菌種有效期以接入斜面培養(yǎng)基日起一個(gè)月?!?.2.2.4培養(yǎng)后,進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢并觀察其菌落形態(tài)特征。確認(rèn)符合后置于5℃的冰箱內(nèi)保存。使用時(shí)將培養(yǎng)出的斜面用5ml的滅菌生理鹽水將斜面上的菌落洗下制成108菌懸液使用?!驳谌?.2.2.5在第三代菌種有效期內(nèi)進(jìn)行第四代的接種傳代。6.2.3第四、

7、五代工作菌種的制備:6.2.3.1從5℃的冰箱內(nèi)取出第三代工作菌種,用冷卻的滅菌接種環(huán)挑取1個(gè)菌落接種于相應(yīng)的瓊脂斜面培養(yǎng)基中,置于35~37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18~24小時(shí)后,進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢同時(shí)觀察其菌落形態(tài)特征。確認(rèn)符合后置于5℃的冰箱內(nèi)作為第四代工作菌種保存,備用?!沧ⅲ旱谒拇臃N出的斜面數(shù)量是根據(jù)該月的該菌種的用量進(jìn)行接種的。菌種有效期以接入斜面培養(yǎng)基日起一個(gè)月?!矲D-002/0上海11制藥有限公

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