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《討論補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)局灶性腦缺血大鼠血管新生的影響 .doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、討論補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)局灶性腦缺血大鼠血管新生的影響 腦缺血后由于腦組織缺血、缺氧引起缺血半暗區(qū)神經(jīng)元變性、壞死,而導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損,因此,盡快恢復(fù)缺血區(qū)的血液供應(yīng)對(duì)缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)至關(guān)重要,而缺血半暗區(qū)血流的恢復(fù)有賴于側(cè)支循環(huán)的建立。血管新生是改善腦組織血流供應(yīng)的一種有效方法,對(duì)中風(fēng)患者的預(yù)后十分關(guān)鍵,是近年來(lái)中風(fēng)研究的熱點(diǎn)之一。補(bǔ)陽(yáng)還五湯是中醫(yī)治療缺血性腦損傷的有效經(jīng)典方劑,前期研究表明,補(bǔ)陽(yáng)還五湯能顯著提高局灶性腦缺血模型大鼠神經(jīng)功能,增強(qiáng)腦缺血后血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfacto
2、r,VEGF)及其受體Flk1的表達(dá),那么補(bǔ)陽(yáng)還五湯是否可以促進(jìn)血管新生進(jìn)而抗腦缺血損傷?本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法觀察腦缺血后血管性血友病因子(vonwillebrandfactor,vWF)的表達(dá),探討腦缺血是否可以誘發(fā)缺血周圍區(qū)的血管新生,以及補(bǔ)陽(yáng)還五湯是否可以促進(jìn)腦缺血大鼠缺血區(qū)血管新生,為腦缺血后循環(huán)重建和功能恢復(fù)提供一個(gè)新的思路和方法?！ ?材料與方法 動(dòng)物 清潔級(jí)SD大鼠100只,體重250～300g,雌雄各半,購(gòu)于上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心?！ ∷幬铩 ⊙a(bǔ)陽(yáng)還五湯處方來(lái)源于清王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》,按原方組成:黃芪120g、
3、赤芍10g、川芎10g、當(dāng)歸尾10g、地龍(研末)10g、紅花10g、桃仁10g,中藥飲片購(gòu)自湖南省中醫(yī)研究院,為同一批藥材,經(jīng)鑒定符合2005年《中國(guó)藥典》的規(guī)定。補(bǔ)陽(yáng)還五湯傳統(tǒng)湯劑制備:傳統(tǒng)飲片先用清水浸泡30min,第一煎加藥材5倍體積水,煎汁30min,二煎5倍體積水,煎汁30min,兩煎混合,每毫克含生藥g,置于4℃下冷藏備用?！ ≡噭 WF單克隆抗體、羅丹明紅(rhodaminered)、異硫氰酸熒光黃(FITC)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;BrdU單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Chemico公司;重組人血管內(nèi)皮抑制素(endo
4、statin,ED)購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院;SABC試劑盒、AEC顯色劑購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;TTC(2,3,5-triphenyltetrazoliumchoride)、PBS磷酸鹽緩沖液(mol/L,Ph值～)均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司;水合氯醛、雙氧水均購(gòu)自北京鼎國(guó)生物工程有限公司?！ x器 英國(guó)Thermo公司E60冰凍切片機(jī);日本Olympus公司BX51光學(xué)顯微鏡及()圖像分析系統(tǒng);上海玻璃儀器一廠自動(dòng)雙重純水蒸餾器;杭州藍(lán)天化驗(yàn)儀器廠ZD-600電熱恒溫水浴箱;上海臺(tái)之衡電子衡器有限公司F
5、A型電子天平。 動(dòng)物分組與給藥方法 90只大鼠造模成功后隨機(jī)分為模型組、補(bǔ)陽(yáng)還五湯組、ED組和補(bǔ)陽(yáng)還五湯+ED組,另設(shè)正常對(duì)照組、假手術(shù)組各5只,假手術(shù)組只打開頸部皮膚,暴露頸部血管后不做其它任何處理即縫合。造模成功動(dòng)物術(shù)后分別存活1、7、14天和28天后處死,每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各5只。補(bǔ)陽(yáng)還五湯組動(dòng)物于術(shù)后蘇醒2h后起按4mL/kg,灌服補(bǔ)陽(yáng)還五湯藥液,每日1次;ED組動(dòng)物于術(shù)后按mg/kg腹腔注射ED,前3天每天1次,之后每周2次;補(bǔ)陽(yáng)還五湯加ED組動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行上述兩組動(dòng)物的操作;上述3組按50mg/kg腹腔注射5-嗅脫氧尿嘧
6、啶核苷進(jìn)行累積標(biāo)記,前3天每天1次,之后每周2次,動(dòng)物若死亡則隨機(jī)補(bǔ)充。其他各組動(dòng)物均給予等體積無(wú)菌蒸餾水,自由飲食、活動(dòng)。 動(dòng)物造?！ 〔捎梦墨I(xiàn)改良的大腦中動(dòng)脈線栓法建立局灶性腦缺血大鼠模型,10%水合氯醛(4mL/kg)腹腔注射麻醉,固定后頸部正中消毒,然后做一長(zhǎng)約～cm的切口,鈍性分離出右側(cè)頸總動(dòng)脈,在其遠(yuǎn)心端分叉處分離出頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈,結(jié)扎頸總動(dòng)脈和靠近氣管的頸外動(dòng)脈,然后在頸總動(dòng)脈分叉處近心端作一小切口,將一段一端鈍圓的4-0尼龍線由頸總動(dòng)脈插入至頸內(nèi)動(dòng)脈,感覺(jué)到有輕微阻力為止,大約進(jìn)入mm,然后結(jié)扎固定,縫合切口
7、,在切口及周圍涂抹抗生素。假手術(shù)組僅切開皮膚,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈后即縫合。正常組不做任何特殊處理。手術(shù)過(guò)程中室溫保持在20～30℃并使用加熱墊或白熾燈照射。術(shù)后將動(dòng)物放入清潔的飼養(yǎng)盒中,若死亡則隨機(jī)補(bǔ)充造模?！ 〕晒δＰ蜆?biāo)準(zhǔn) 行為學(xué)改變表現(xiàn)為動(dòng)物蘇醒后提尾時(shí)左側(cè)前肢內(nèi)收屈曲;同側(cè)Horner征(頸交感神經(jīng)麻痹綜合征:瞳孔縮小、眼瞼下垂及眼裂狹小、眼球內(nèi)陷和患側(cè)額部無(wú)汗);爬行時(shí)向左劃圈;站立時(shí)左側(cè)傾倒。TTC染色后梗死區(qū)域呈白色,位置在皮層下,大腦的一側(cè),對(duì)側(cè)大腦半球正常腦組織則被染成紅色。神經(jīng)功能評(píng)分待清醒2h后按文獻(xiàn)的五級(jí)評(píng)分
8、標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,0級(jí):行為無(wú)明顯變化(0分);1級(jí):左前肢屈曲,左后肢伸展(1分);2級(jí):有左側(cè)追尾現(xiàn)象(2分);3級(jí):行走困難,搖擺不定(3分);4級(jí):無(wú)自發(fā)性活動(dòng),有意識(shí)障礙(4分)。將第1、2、3級(jí)(1～3分)大鼠確定為成功模型分入各組
