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《甲型h1n1流感病毒室檢測技術(shù)方案》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、甲型H1N1流感病毒實驗室檢測技術(shù)方案(試行)本方案旨在為全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室提供甲型H1N1流感病毒實驗室檢測技術(shù)方案，不用作商業(yè)活動或贏利目的。一、標本的采集種類和要求1、推薦采集的呼吸道標本種類疾病發(fā)病后應(yīng)盡快采集如下標本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標本應(yīng)置于無菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4℃（冰箱），并馬上送至實驗室。（臨床樣品采集人員及實驗室檢測人員的感染控制指導(dǎo)請見相關(guān)文件。）采樣同時填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標本采樣單。（附表1）2、拭子的選擇標本應(yīng)
2、使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維），用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭子和木柄。標本采集管應(yīng)包含3毫升病毒采樣液（含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，阻止細菌和真菌生長的抗生素，緩沖液）3、臨床標本儲存要求保存在4℃（不能超過4天）或者-70℃或-70℃以下。有條件的實驗室均應(yīng)保存在-70℃或-70℃以下。不應(yīng)保存在-20℃。4、標本的分裝處理標本送至實驗室后，立即進行處理，避免反復(fù)凍融。將原始標本分為三份，一份用于核酸檢測，一份用于病毒分離，一份保存待復(fù)核。5、標本的運輸疑似人感染甲型H1N1感染病例列為A類，用UN2814包裝運輸。填寫疑似人感染甲
3、型H1N1感染病例標本送檢單（附表2）。二、核酸檢測基于PCR原理的核酸檢測方法是一種快速有效的診斷方法，在突發(fā)傳染病應(yīng)急工作中發(fā)揮了巨大作用。1、基于real-timeRT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物和探針序列為美國CDC設(shè)計）：4月29日WHO網(wǎng)站上公布了美國CDC設(shè)計的針對此次甲型H1N1流感病毒的real-timeRT-PCR引物和探針，此實驗用于檢測疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道樣本,因此，用此real-timeRT-PCR的方法，建議首先篩選甲型流感病毒并排除季節(jié)性流感病毒和H5N1禽流感病毒。rea
4、l-timeRT-PCR方法參見附件3（中文翻譯版），附件4（英文原版）。2、基于RT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物序列為國家流感中心設(shè)計）：目前國家流感中心設(shè)計了RT-PCR方法檢測新的甲型H1N1流感病毒。RT-PCR的方法參見附件5。三、病毒分離鑒定可采用雞胚和/或MDCK細胞進行流感病毒分離。具備相應(yīng)條件的網(wǎng)絡(luò)實驗室在收到標本后24h內(nèi)進行病毒接種。具體方法參見附件6和7。四、適用于實驗室工作人員的甲型H1N1流感病毒生物安全（一）實驗室級別及個人防護1、對采集自屬于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的臨
5、床標本進行的診斷性實驗工作，在BSL-2實驗室內(nèi)進行。所有樣本操作均應(yīng)在生物安全柜（BSC）內(nèi)進行。遵循生物安全三級個人防護。2、對采集自屬于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的臨床標本進行的病毒分離培養(yǎng)工作，應(yīng)在BSL-3實驗室內(nèi)進行，并遵循生物安全三級個人防護。（二）健康監(jiān)測1、所有人員均應(yīng)自測發(fā)熱及其他癥狀。2、感染甲型H1N1流感病毒的癥狀包括咳嗽、喉嚨痛、嘔吐、腹瀉、頭痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不適，應(yīng)立即向上級報告。3、如有人員在無防護情況下暴露于甲型H1N1流感確診病例的臨床標本或活病毒，應(yīng)考慮在暴露后的7天時間里使
6、用奧司他韋或扎那米韋進行抗病毒藥物預(yù)防。五、附表和附件附表1疑似人感染甲型H1N1感染病例標本采樣單附表2疑似人感染甲型H1N1感染病例標本送檢單附件3：real-timeRT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規(guī)程(2009版)（中文）附件4：real-timeRT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規(guī)程(2009版)（英文）附件5：RT-PCR方法檢測甲型流感病毒附件6：甲型H1N1流感病毒雞胚分離方法附件7：甲型H1N1流感病毒MDCK細胞分離方法附表1疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標本采樣單姓名性別年齡職業(yè)※現(xiàn)住址發(fā)病日期
7、標本#種類標本量（g或ml）采集日期備注※選項：參照傳染病報告卡。#選項：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其他（如為其他，請在表格中注明）采集人員：采集單位（蓋章）：附表2疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標本送檢單姓名性別年齡職業(yè)※現(xiàn)住址發(fā)病日期標本#種類標本量*（g或ml）采集日期備注※選項：參照傳染病報告卡#選項：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其他（如為其他，請在表格中注明）*標本量：如果同一份標本有多個包裝請注明。填表人員：送樣時間：單位（蓋章）：附
8、件3real-timeRT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規(guī)程中文翻譯版（請同時參考英文原版）請注意：體系建立請參照所使用試劑盒供應(yīng)商所提供的使用說明。本規(guī)程中的體系僅供參考。美國CDC實時RTPCR(rRTPCR)
