甲型h1n1流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)方案

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1、甲型H1N1流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)方案(試行)本方案旨在為全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室提供甲型H1N1流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)方案，不用作商業(yè)活動或贏利目的。一、標(biāo)本的采集種類和要求1、推薦采集的呼吸道標(biāo)本種類疾病發(fā)病后應(yīng)盡快采集如下標(biāo)本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標(biāo)本應(yīng)置于無菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4℃（冰箱），并馬上送至實(shí)驗(yàn)室。（臨床樣品采集人員及實(shí)驗(yàn)室檢測人員的感染控制指導(dǎo)請見相關(guān)文件。）采樣同時(shí)填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本采樣單。（附表1）2、拭子的選擇標(biāo)本應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖

2、維），用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭子和木柄。標(biāo)本采集管應(yīng)包含3毫升病毒采樣液（含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，阻止細(xì)菌和真菌生長的抗生素，緩沖液）3、臨床標(biāo)本儲存要求保存在4℃（不能超過4天）或者-70℃或-70℃以下。有條件的實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)保存在-70℃或-70℃以下。不應(yīng)保存在-20℃。4、標(biāo)本的分裝處理標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室后，立即進(jìn)行處理，避免反復(fù)凍融。將原始標(biāo)本分為三份，一份用于核酸檢測，一份用于病毒分離，一份保存待復(fù)核。5、標(biāo)本的運(yùn)輸疑似人感染甲型H1N1感染病例列為A類，用UN2814包裝運(yùn)輸。填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本送檢單（附表2）。二、核酸檢測基于PCR原理的核酸檢測

3、方法是一種快速有效的診斷方法，在突發(fā)傳染病應(yīng)急工作中發(fā)揮了巨大作用。1、基于real-timeRT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物和探針序列為美國CDC設(shè)計(jì)）：4月29日WHO網(wǎng)站上公布了美國CDC設(shè)計(jì)的針對此次甲型H1N1流感病毒的real-timeRT-PCR引物和探針，此實(shí)驗(yàn)用于檢測疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道樣本,因此，用此real-timeRT-PCR的方法，建議首先篩選甲型流感病毒并排除季節(jié)性流感病毒和H5N1禽流感病毒。real-timeRT-PCR方法參見附件3（中文翻譯版），附件4（英文原版）。2、基于RT-PCR的方法檢測新的甲型H

4、1N1流感病毒（引物序列為國家流感中心設(shè)計(jì)）：目前國家流感中心設(shè)計(jì)了RT-PCR方法檢測新的甲型H1N1流感病毒。RT-PCR的方法參見附件5。三、病毒分離鑒定可采用雞胚和/或MDCK細(xì)胞進(jìn)行流感病毒分離。具備相應(yīng)條件的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室在收到標(biāo)本后24h內(nèi)進(jìn)行病毒接種。具體方法參見附件6和7。四、適用于實(shí)驗(yàn)室工作人員的甲型H1N1流感病毒生物安全（一）實(shí)驗(yàn)室級別及個(gè)人防護(hù)1、對采集自屬于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的臨床標(biāo)本進(jìn)行的診斷性實(shí)驗(yàn)工作，在BSL-2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。所有樣本操作均應(yīng)在生物安全柜（BSC）內(nèi)進(jìn)行。遵循生物安全三級個(gè)人防護(hù)。2、對采集自屬于感染甲型H

5、1N1流感病毒疑似病例的患者的臨床標(biāo)本進(jìn)行的病毒分離培養(yǎng)工作，應(yīng)在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵循生物安全三級個(gè)人防護(hù)。（二）健康監(jiān)測1、所有人員均應(yīng)自測發(fā)熱及其他癥狀。2、感染甲型H1N1流感病毒的癥狀包括咳嗽、喉嚨痛、嘔吐、腹瀉、頭痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不適，應(yīng)立即向上級報(bào)告。3、如有人員在無防護(hù)情況下暴露于甲型H1N1流感確診病例的臨床標(biāo)本或活病毒，應(yīng)考慮在暴露后的7天時(shí)間里使用奧司他韋或扎那米韋進(jìn)行抗病毒藥物預(yù)防。五、附表和附件附表1疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本采樣單附表2疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本送檢單附件3：real-timeRT-PCR方法檢

6、測甲型H1N1流感操作規(guī)程(2009版)（中文）附件4：real-timeRT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規(guī)程(2009版)（英文）附件5：RT-PCR方法檢測甲型流感病毒附件6：甲型H1N1流感病毒雞胚分離方法附件7：甲型H1N1流感病毒MDCK細(xì)胞分離方法附表1疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標(biāo)本采樣單姓名性別年齡職業(yè)※現(xiàn)住址發(fā)病日期標(biāo)本#種類標(biāo)本量（g或ml）采集日期備注※選項(xiàng)：參照傳染病報(bào)告卡。#選項(xiàng)：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其他（如為其他，請?jiān)诒砀裰凶⒚鳎┎杉藛T：采集單位（蓋章）：附表2疑似人感染甲型H1

7、N1流感病毒病例標(biāo)本送檢單姓名性別年齡職業(yè)※現(xiàn)住址發(fā)病日期標(biāo)本#種類標(biāo)本量*（g或ml）采集日期備注※選項(xiàng)：參照傳染病報(bào)告卡#選項(xiàng)：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其他（如為其他，請?jiān)诒砀裰凶⒚鳎?標(biāo)本量：如果同一份標(biāo)本有多個(gè)包裝請注明。填表人員：送樣時(shí)間：單位（蓋章）：附件3real-timeRT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規(guī)程中文翻譯版（請同時(shí)參考英文原版）請注意：體系建立請參照所使用試劑盒供應(yīng)商所提供的使用說明。本規(guī)程中的體系僅供參考。美國CDC實(shí)時(shí)RTPCR(rRTPCR)