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《丙型肝炎病毒(hcv)檢驗技術(shù)進(jìn)展探究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、丙型肝炎病毒（HCV）檢驗技術(shù)進(jìn)展探究【中圖分類號】R446.11【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-3783（2012）12-0499-02【摘要】：防控丙型肝炎傳染源及阻斷傳播途徑最為有效的手段就是早期準(zhǔn)確診斷并及時發(fā)現(xiàn)HCV感染者。從傳染源和傳播途徑兩方面控制丙型肝炎[1],筆者將對丙型肝炎病毒臨床檢驗技術(shù)進(jìn)展研究?！娟P(guān)鍵詞】HCV抗原檢測核心抗原核酸檢測技術(shù)（NAT）同時檢測自1989年建立了丙肝病毒抗-HCV檢測方法以來，隨著醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)和儀器的不斷發(fā)展，丙型肝炎的檢測技術(shù)一直處于不斷發(fā)展中。到目前為止，丙型肝炎檢測技術(shù)主要有抗-HCV檢測、HCV-
2、RNA核酸擴(kuò)增檢測、HCV核心抗原的檢測以及同時檢測抗-HCV和HCV核心抗原4種類型。筆者將對丙型肝炎臨床檢驗技術(shù)進(jìn)展研究如下。1抗-HCV的檢測最早出現(xiàn)的HCV檢測技術(shù)是抗-HCV的檢測。由于HCV在病人外周血液中的含量及病毒抗原的含量很低，這就使得用常規(guī)方法難以直接檢測，經(jīng)過十幾年的不斷改進(jìn)和發(fā)展，其檢測方法又演變出多種，如：雙抗原夾心ELISA、間接酶聯(lián)免疫吸附實驗（間接ELISA）、重組免疫印跡法（RIEA）、蛋白芯片檢測法以及免疫層析法。在這些方法之中，重組免疫印跡法（RIBA）是抗體檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，蛋白芯片檢測法主要用于抗-HCV的分型。而ELISA
3、由于其操作簡單，檢測設(shè)備廉價，因此成為應(yīng)用最廣的抗體檢測技術(shù)。根據(jù)出現(xiàn)時間的先后以及使用抗原的不同，抗-HCV檢測技術(shù)可分成三代。第一代抗-HCVIgG試劑盒所用的抗原來自病毒基因組非結(jié)構(gòu)區(qū)（C100）,它的使用使HCV的輸血感染率下降了80%以上。但其缺陷是：靈敏度較低，抗體檢出時間較晚，敏感性也較高，達(dá)到80%?90%,但假陽性較高。第二代試劑除了包被C100抗原外又加入了HCV核心區(qū)多肽C22—3和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原C33CO抗-C22-3和抗-C33C感染后出現(xiàn)較早，敏感性和特異性明顯提高，感染后8?12周即可檢測。且對HCV的特異性較好，二者聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步
4、提高檢出率。第三代HCV抗體ELISA試劑中采用了重組的NSS多肽，核心區(qū)抗原比例相對下降，而相應(yīng)地增加了非結(jié)構(gòu)區(qū)的NSS區(qū)C33C抗原的比例，添加了NSS區(qū)抗原使其敏感性和特異性得到進(jìn)一步改善。2HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)從外周血中檢出HCVRNA是HCV復(fù)制活躍的可靠指標(biāo)，在感染2個星期內(nèi)的血清中可檢測到HCVRNA,在感染自然恢復(fù)前血清中HCVRNA將達(dá)到一個高峰，目前NAT檢測被國內(nèi)外部分機(jī)構(gòu)作為HCV感染的確認(rèn)方法。但HCVRNA在達(dá)到峰值或重新出現(xiàn)前數(shù)天或數(shù)周內(nèi)偶爾也可能檢測不到［2］。同時HCVRNA還受進(jìn)食的影響，易與血中脂質(zhì)及脂蛋白結(jié)合，降
5、低檢出率。因此在一定程度上影響了NAT檢測方法的完美。另外由于NAT檢測技術(shù)本身在技術(shù)和設(shè)備上要求較高，且耗時、實驗步驟較多（其中任何步驟出現(xiàn)問題均影響其檢出）,因此該方法也容易因污染而出現(xiàn)假陽性，難以在常規(guī)工作或基層實驗室推廣，限制了其應(yīng)用的普遍性。NAT檢測技術(shù)同為檢測HCVRNA,但不同的廠商發(fā)展出不同的方法和技術(shù)，其中PCR技術(shù)發(fā)展得最為迅速，也得到了最廣泛的應(yīng)用，最早的是RT-PCR,然后是套式PCR,現(xiàn)在是實時熒光定量PCR,檢測靈敏度特異性不斷提高，且實現(xiàn)了全自動定量檢測。最新的NAT研究有環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴(kuò)增技術(shù)（LAMP）以及基因芯片技術(shù)［3,4
6、］,由于LAMP技術(shù)操作簡單，且無需特殊儀器，具有廣闊的應(yīng)用前景。3HCV抗原的檢測近年來對HCV抗原的檢測方法的研究不斷取得進(jìn)展，關(guān)鍵點在于單克隆抗體的研制以及抗原抗體復(fù)合物解離劑的研究。近期美國Ortho公司已推出了用雙抗體夾心法定性或定量檢測血清樣品中總的或游離的HCV核心抗原ELISA試劑盒，與RT-PCR方法相比，具有操作簡單、耗時短、對實驗環(huán)境要求較低以及假陽性率低等特點，在臨床上可用于HCV血清學(xué)轉(zhuǎn)換前的早期急性丙型肝炎診斷、抗-HCV陽性感染者的病毒血癥分析以及HCV感染者治療前后病毒血癥追蹤分析等。HCV核心抗原存在的時間較短（約27?70d）
7、,所以HCV核心抗原的檢測還要結(jié)合抗-HCV的結(jié)果。同時HCV核心區(qū)基因的變異也可能影響了HCV核心抗原的檢測，比如HCV核心區(qū)49位氨基酸的突變就降低了抗原測定的敏感性。改進(jìn)現(xiàn)行試劑盒的主要途徑是提高單克隆抗體對于天然抗原的構(gòu)象表位的親和力。對于非結(jié)構(gòu)蛋白的檢測主要為NS3、NS4和NS5位點的蛋白，由于這部分蛋白出現(xiàn)變異的概率較大，目前僅見報道。4同時檢測抗-HCV和HCV核心抗原聯(lián)合檢測抗原抗體的思路是HCV篩查試劑盒和血清學(xué)檢測的發(fā)展方向。目前主要把HCV核心抗原和外周蛋白抗體及部分核心抗體相結(jié)合的檢測試劑盒。HCV核心抗原是HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感
8、染指標(biāo)，幾乎與HCVRN
