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1、基于HPLC指紋圖譜不同產(chǎn)地升麻質(zhì)量評價(jià)探究［摘要］建立不同產(chǎn)地升麻藥材的指紋圖譜。使用Kromasil色譜柱(4.6mmX250mm,5um),流動相乙月青-0.1%甲酸溶液，梯度洗脫，柱溫35°C,流速1.0mL?min-1,檢測波長254nmo提取12個(gè)色譜峰作為指紋圖譜共有峰，采用相似度評價(jià)、聚類分析、主成分分析等方法，對所收集的21批樣品進(jìn)行系統(tǒng)比較與歸類。結(jié)果確定了12個(gè)共有峰,將不同產(chǎn)地的樣品分為3類。該法重復(fù)性好，簡便可靠，可以為不同產(chǎn)地升麻的質(zhì)量控制和評價(jià)提供依據(jù)。［關(guān)鍵詞］升麻；指紋圖譜升麻為毛滾科植物大三葉升麻Cimicifugaheracleif
2、oliaKom.、興安升麻C.dahurica(Turcz.)Maxim.或升麻C.foetidaL.的干燥根莖［1］,主產(chǎn)于四川、青海、陜西、云南、東北等地，是我國傳統(tǒng)中藥材。升麻始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，其味辛、微甘，微寒，歸肺、脾、胃、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、發(fā)表透疹、升舉陽氣的功能，用于風(fēng)熱頭痛、齒痛、口瘡等。升麻在全國多個(gè)地區(qū)均有種植，但不同產(chǎn)地升麻的質(zhì)量差異有待進(jìn)一步研究。2010年版《中國藥典》一部中，以異阿魏酸的含量作為其質(zhì)量控制指標(biāo)，已有研究報(bào)道將3種酚酸類成分作為升麻的質(zhì)量控制指標(biāo)[2],對不同產(chǎn)地升麻進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，但數(shù)據(jù)處理較為簡單。為了進(jìn)一步
3、研究并揭示不同產(chǎn)地升麻的質(zhì)量差異，本試驗(yàn)采用指紋圖譜結(jié)合多種化學(xué)計(jì)量學(xué)的數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行分析，進(jìn)而評價(jià)不同產(chǎn)地升麻的質(zhì)量。1材料日本島津公司ShimadzuLC-20AB高效液相色譜系統(tǒng)，包括在線脫氣機(jī).ProminenceSIL-20A自動進(jìn)樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測器、CTO-20A柱溫箱；BS2242S電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）;RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琪）。異阿魏酸（純度99%,批號ZL1203089）.阿魏酸（純度99%,批號ZL1203158）.咖啡酸對照品（純度99%,批號ZL1202169）均購自南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司；
4、甲酸（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）；乙睛（色譜純，美國天地公司）；水（杭州娃哈哈公司）。升麻藥材共21批，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)陳建偉教授鑒定為正品，密封保存于陰涼干燥處。其來源見表1。2方法與結(jié)果2.1色譜條件KromasilC18色譜柱（4.6niniX250mni，5um）；流動相乙睛（A）-0.1%甲酸溶液（B）,梯度洗脫，0?25min,5%?13%A,25?60min,13%?18%A,60?88min,18%?28%A,88?110min,28%?50%A,110?115min,50%?60%A,115?120min,60%?5%A,流速1.0mL?min-1
5、；測定波長254nm；柱溫35°C；進(jìn)樣量10uLo2.2混合對照溶液的制備精密稱取異阿魏酸、阿魏酸及咖啡酸對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制得每毫升分別含異阿魏酸0.443mg,阿魏酸0.451mg,咖啡酸0.439mg的混合溶液，搖勻，作為對照品儲備液。2.3供試品溶液制備取升麻藥材粉末約lg,精密稱定，置150mL圓底燒瓶中，加入75%乙醇20mL,回流提取3次，每次1h,濾過，濾液減壓蒸干，用80%甲醇溶解并定容到10mL量瓶中，搖勻，0.45pm微孔濾膜濾過，即得。2.4指紋圖譜方法學(xué)考察2.4.1精密度試驗(yàn)取6號升麻供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，每次10uL,考
6、察色譜峰保留時(shí)間的一致性，結(jié)果表明,共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD分別為0.05%?2.3%,1.24%?2.62%,說明各主要色譜峰保留時(shí)間與峰面積基本一致，符合指紋圖譜的要求。2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取6號升麻供試品溶液10UL,分別在0,2,4,8,16,24h進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD分別為0.05%?2.5%,0.93%?1.22%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.4.3重復(fù)性試驗(yàn)取同批號樣品6份，按2.3項(xiàng)下方法制備樣品，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果表明，共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD分別為1
7、.24%?2.62%,1.62%?2.37%,符合指紋圖譜的要求。2.5樣品測定按2.3項(xiàng)下方法制備21批供試品溶液，分別精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液各10uL,注入到高效液相色譜儀測定，記錄色譜圖，共獲得12個(gè)共有峰，通過對照品指認(rèn)，其中3個(gè)共有峰分別為咖啡酸（1號峰）、異阿魏酸（2號峰）、阿魏酸（3號峰），結(jié)果見圖1。2.6指紋圖譜的建立及分析2.6.1參比峰的選擇在各批次樣品圖譜中，2號色譜峰（異阿魏酸）分離度較好，為樣品所有樣品共有，故選擇2號峰為參照峰。2.6.2指紋圖譜的建立及相似度評價(jià)將21批升麻樣品色譜圖導(dǎo)入《中藥色
