酶免疫熒光測量中的數(shù)據(jù)處理

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1、第一章引言20世紀(jì)中葉以來，一系列的免疫分析技術(shù)，逐漸被創(chuàng)立，免疫分析技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的新方法之一。其特點是高特異性、高靈敏度，能檢測大多數(shù)臨床上有意義的物質(zhì)。由于免疫分析的高特異性，因而能用于復(fù)雜樣品如尿液、血液等的分析，分析費用低廉，操作簡便，所以，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究領(lǐng)域。放射免疫分析技術(shù)(Radioimmunoassay，RIA)應(yīng)用了放射性同位素標(biāo)記、測量和免疫反應(yīng)的原理，在大多數(shù)情況下可以大大簡化樣品的提純分離工作，其靈敏度高、特異性強是其他方法所不能替代的，是競爭性分析法中創(chuàng)建最早、應(yīng)用最廣的一種。放射免疫分析技術(shù)的問世，是定量分析技術(shù)一項劃時代的進(jìn)步，將微量生

2、物樣品檢測化學(xué)分析法的最小檢出值，由毫克、微克級提高到納克、皮克甚至毫皮克級的水平，從而為生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論研究和臨床疾病診斷提供了新的實驗手段，為加速生物醫(yī)學(xué)現(xiàn)代化進(jìn)程作出了非兒的貢獻(xiàn)。在RIA基本理論的基礎(chǔ)上派生出一類非放射性標(biāo)記免疫方法，其中已被廣泛采用的有酶聯(lián)免疫分析法(EIA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)。它們共同的優(yōu)勢是具有和姒相似的高特異性和高靈敏度，而其標(biāo)記物制各簡易、有效期長、無污染、實現(xiàn)自動化分析系統(tǒng)等方面又超過RIA。1．1放射免疫分析法(Radioimmunoassay，砒A)放射免疫分析法，又稱放射性體外分析法，或競爭放射

3、分析法。Berson和Yelow于1959年首次提出了競爭抑制免疫反應(yīng)原理，創(chuàng)建了RIA檢測技術(shù)，用于糖尿病患者胰島素含量的測定【1】。放射免疫分析是利用放射性核素示蹤技術(shù)的高度靈敏性和免疫化學(xué)的高度特異性相結(jié)合，建立的一種體外超微量分析方法?？梢杂脕頊y定多種抗原和抗體，包括病毒、細(xì)菌、寄生蟲等。廣泛應(yīng)用于內(nèi)分泌學(xué)、免疫學(xué)、藥理學(xué)、傳染病學(xué)、腫瘤學(xué)、心血管疾病學(xué)、血液學(xué)、婦產(chǎn)科學(xué)等臨床診斷和基礎(chǔ)理論的研究。在內(nèi)分泌學(xué)中，絕大多數(shù)激素都可用剛A測定，如胰島素、生長激素、三碘甲狀腺原氨酸、甲狀腺素、促甲狀腺激素、促甲狀腺激素釋放激素等。RIA用來診斷和鑒別診斷各種內(nèi)分泌疾病，還可了解內(nèi)分泌各

4、腺體的功能狀態(tài)，研究激素生成、分泌、降解的生理或病理代謝過程等【21。在免疫學(xué)中可測各種免疫球蛋白，為判斷機體免疫能力提供了重要價值?？捎糜谠\斷疾病、如用甲狀腺球蛋白抗體，抗微粒體抗體診斷慢性淋巴細(xì)胞性甲狀第一章引言腺炎或用乙肝抗原診斷乙肝有的則可了解機體藥物反應(yīng)情況，如胰島素抗體存在時，胰島素對機體就不能產(chǎn)生作用等pJ。此外，藥理學(xué)的RIA近年來發(fā)展也很快，用于診斷藥物中毒、監(jiān)測藥物在體內(nèi)濃度，為調(diào)整劑量提供依據(jù)。在傳染病中測乙肝抗原在診斷肝炎分型中有著重要價值，目前已發(fā)展到鑒別丙型肝炎和丁戊型肝炎的水平并且對分析傳染源、傳染途徑及制定預(yù)防措施均有指導(dǎo)意義。在血液學(xué)中可測鐵蛋白、血纖維

5、蛋白溶酶、血小板抗體、紅細(xì)胞生成素、Rh因子等，為血凝機制的研究和一些血液病的診斷與發(fā)病機制的研究丌拓了廣闊的前途。在心血管疾病中，最近建立的血管內(nèi)皮素的RIA為研究肌紅蛋白強效收縮血管的生理病理及臨床意義提供了手段。在腫瘤學(xué)中應(yīng)用了腫瘤相關(guān)的RIA，用于普查、診斷、定位和監(jiān)測疾病的發(fā)展過程及其轉(zhuǎn)歸，由單一指標(biāo)發(fā)展到聯(lián)合測定，為早期診斷和治療起到了積極作用；在婦產(chǎn)科和計劃生育中RIA技術(shù)為診斷早早孕和絨毛膜上皮癌提供了有效手段。各種類固醇激素的RIA，對研究新的避孕藥、提高避孕效果和減少副作用具有重要作用卜¨。放射性免疫分析方法具有以下優(yōu)點：1．靈敏度高，其最小檢測值可達(dá)ng．mpg水平

6、(10。9—10。4g)，是一般化學(xué)分析法所達(dá)不到的；2．特異性強，這是由于抗原抗體反應(yīng)的高度特異性決定，如嗎啡類抗體只能與嗎啡類抗原結(jié)合，因此不需要對樣品進(jìn)行提純即可直接測定；3．快速、簡便，免除了煩瑣的化學(xué)提純步驟，可以利用自動加樣計數(shù)、記錄計算等方法，使方法自動化，從而減少了人力，提高了工作效率，增加測量樣品的數(shù)量，滿足廣大基層單位臨床及研究工作中分析大量樣品的要求。放射免疫分析方法也存在缺點：1．應(yīng)用放射性同位素，主要是應(yīng)用125I標(biāo)記，由于藥劑中標(biāo)記同位素的放射性，會使藥劑本身分解，從而使藥劑失效。2．由于常用的放射性同位素半衰期短，藥劑只能保存較短的時間，有效時間短：3．試驗

7、廢物難以處理，容易對環(huán)境造成放射性污染等。因此自非同位素標(biāo)記技術(shù)得到了極大地重視和發(fā)展，并逐漸成為能與RIA相競爭的技術(shù)，盡管如此，放射免疫分析在現(xiàn)在免疫分析中仍占有較大的比例。1．2化學(xué)發(fā)光免疫分析法(Chemiluminescentlmmunoassay，CLIA)化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技術(shù)(剛A)理論的基礎(chǔ)上，以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，Halman[91等在1977