維生素E對(duì)日本沼蝦繁殖性能及相關(guān)基因表達(dá)的影響

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1、2018屆研究生碩士學(xué)位論文分類號(hào)：學(xué)校代碼：10269密級(jí)：學(xué)號(hào)：51151300083EastChinaNormalUniversity碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：維生素E對(duì)日本沼蝦繁殖性能及相關(guān)基因表達(dá)的影響院系：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：動(dòng)物學(xué)研究方向：水生生物發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙云龍教授學(xué)位申請(qǐng)人：李一鳴2018年4月Dissertationformasterdegreein2018Universitycode:10269StudentNo.:511513000

2、83EastChinaNormalUniversityEffectofdietaryvitaminEonreproductionandexpressionofreproductionrelatedgenesofMacrobrachiumnipponenseDepartment:SchoolofLifeScienceMajor:ZoologyResearchdirection:HydrozoologySupervisor:Prof.YunlongZhaoCandidate:YimingLiApril,

3、2018李一鳴碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名職稱單位備注李利珍教授上海師范大學(xué)主席李愷教授華東師范大學(xué)委員禹娜教授華東師范大學(xué)委員李東亮講師華東師范大學(xué)秘書中文摘要中文摘要日本沼蝦（Macrobrachiumnipponense）又稱青蝦，隸屬長臂蝦科，是我國重要的淡水經(jīng)濟(jì)物種。近年來隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，日本沼蝦種質(zhì)退化現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，使得成蝦的繁殖性能下降，限制了日本沼蝦苗種培育和成蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前從營養(yǎng)學(xué)的角度針對(duì)日本沼蝦繁殖性能的研究還較少，有必要開展該蝦繁殖性能方面的研究。本文以日

4、本沼蝦作為研究對(duì)象，綜合運(yùn)用營養(yǎng)學(xué)、生理生化及分子生物學(xué)技術(shù)，輔以組織學(xué)和電鏡技術(shù)等，較為詳細(xì)地研究了維生素E對(duì)日本沼蝦繁殖性能的影響，可為深入研究日本沼蝦繁殖生物學(xué)積累基礎(chǔ)資料。本論文的主要研究結(jié)果如下：1.飼料中不同維生素E水平對(duì)日本沼蝦雌蝦生長及繁殖性能的影響維生素E對(duì)于促進(jìn)水生生物性腺發(fā)育具有重要作用。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)挑選平均體重為（0.358±0.033）g的雌蝦，分別設(shè)置0、40、80、160、320、640mg/kg梯度維生素E組進(jìn)行10周養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，探究不同維生素E水平對(duì)其繁殖性能及抗氧化能力

5、的影響。結(jié)果顯示：隨著維生素E水平上升，日本沼蝦雌蝦的成活率、肝體指數(shù)無顯著差異，當(dāng)維生素E水平為80mg/kg時(shí)，對(duì)雌蝦增重率、飼料系數(shù)和抱卵率都有促進(jìn)作用。非特異性免疫及抗氧化酶活性指標(biāo)檢測發(fā)現(xiàn)，LYZ、ACP和AKP酶活力在維生素E含量為160mg/kg時(shí)活性最高；SOD、CAT和GSH-PX酶活力則呈現(xiàn)下降趨勢；MAD活力在80-160mg/kg時(shí)表現(xiàn)活性最低。HE切片及油紅染色結(jié)果顯示，卵巢及肝胰腺組織在適宜維生素E添加下，會(huì)使R細(xì)胞數(shù)量增加，轉(zhuǎn)運(yùn)泡內(nèi)容物質(zhì)增多，脂滴數(shù)量增加；而過量維生素

6、E水平則會(huì)使組織中出現(xiàn)大量空泡，對(duì)結(jié)構(gòu)造成破壞。卵巢發(fā)育相關(guān)基因Vg及VgR在不同維生素E水平下進(jìn)行表達(dá)分析，結(jié)果顯示，在一定量的維生素E（160mg/kg）水平添加下，對(duì)其卵巢發(fā)育有明顯促進(jìn)作用。2.飼料中不同維生素E水平對(duì)日本沼蝦雄蝦生長及繁殖性能的影響實(shí)驗(yàn)選取平均體重為（0.252±0.031）g的雄蝦進(jìn)行10周養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，并將剩余蝦進(jìn)行嗜水氣單胞菌攻毒實(shí)驗(yàn)一周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相較雌蝦養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，雄蝦的增重率顯著高于雌蝦生長速度，而成活率與肝體指數(shù)并無顯著差異。維生素E水平為80mg/kg時(shí)，雄蝦

7、增重率、飼料利用率及性腺發(fā)育相關(guān)指標(biāo)都表現(xiàn)最佳。I中文摘要抗氧化及非特異免疫酶活性檢測中發(fā)現(xiàn)，雄蝦酶活力整體高于雌蝦，并在維生素E水平為80-160mg/kg時(shí)活性最強(qiáng)。脂肪酸檢測發(fā)現(xiàn)，雄蝦的肝胰腺脂肪酸組成受不同維生素E水平影響顯著。具體表現(xiàn)在隨著維生素E含量上升，亞油酸（C18：2n-6，LOA）、DPA（C22：5n-3）和總多不飽和脂肪酸（∑PUFAs）的含量呈下降趨勢；而EPA（C20:5n-3）、DHA（C22:6n-3）和總飽和脂肪酸（∑SFAs）的含量呈現(xiàn)不同程度的上升趨勢；亞麻酸（

8、18:3n-3，LNA）和總單不飽和脂肪酸（∑MUFAs）的含量沒有顯著差異。嗜水氣單胞菌攻毒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，積累死亡率在維生素E含量為40-160mg/kg時(shí)表現(xiàn)最低。對(duì)攻毒實(shí)驗(yàn)后的雄蝦的肝胰腺及精巢組織進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)，適宜維生素E水平能夠保護(hù)肝胰腺和精巢組織結(jié)構(gòu)完整性并且提高免疫能力，而高濃度維生素E對(duì)組織有破壞作用。3.日本沼蝦細(xì)胞周期依賴激酶2基因的克隆及維生素E對(duì)其表達(dá)影響的研究選取日本沼蝦肝胰腺cDNA為模板，克隆得到細(xì)胞周期蛋白依賴激酶2基因全長序列。該