資源描述：
《農(nóng)桿菌介導(dǎo)tcs基因?qū)氪蠖沟倪z傳轉(zhuǎn)化.研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文3．1材料?????????????????????????????????243．1．1植物材料和菌株???????????????????????????243．1．2儀器與設(shè)備?????????????????????????????243．1．3藥品與試劑?????????????????????????????243．2方法?????????????????????????????????253．2-1農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA的提取???????????????????????．253．2。2大豆基因組DNA的提取??????
2、?????????????????．253．2．3抗性植株的PCR檢測????????????????????????．．253．2．4抗性植株的PCR．Southern雜交?????????????????????263．3結(jié)果與分析??????????????????????????????303．3．1大豆基因組DNA的提取???????????????????????．303．3．2轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測????????????????????????。．303．3．3轉(zhuǎn)基因植株的PCR—Southern分子雜交檢測????????????????313
3、．4本章小結(jié)???????????????????????????????334討論????????????????????????????????????????????．．344．1大豆再生頻率較高的基因型篩選?????????????????????344．2抗生素的篩選和選擇??????????????????????????344．3進(jìn)一步解決的問題???????????????????????????34結(jié)論???．???????．???????????．????????????????????????36參考文獻(xiàn)?????????????????
4、??????????????????????37附錄??????????????????????????????????????????????43攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文????????????????????????????45致謝???????????????????????????????????．??????????。46萬方數(shù)據(jù)中英文對照表．V一萬方數(shù)據(jù)1緒論大豆_[Glycinemax(L．)Merrill]是重要的糧食、油料和飼料作物，是植物蛋白的主要來源，在國內(nèi)外市場上占有十分重要的地位。隨著工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展，環(huán)境污染的加劇，生態(tài)平衡被破壞
5、，大豆的病蟲害越來越嚴(yán)重，直接威脅著大豆生產(chǎn)Ilj。植物遺傳轉(zhuǎn)化是利用分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)將外源基因插入受體植物基因組中，并在話代植株中得到表達(dá)的過程。20世紀(jì)后期，隨著分子生物學(xué)及生物技術(shù)的發(fā)展，植物基因工程尤其是遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)取得了很大進(jìn)展i2J。1984年，Herrera．Esfrella等【3】首次利用農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒將外源基因?qū)霟煵莴@得成功。隨后，重要的農(nóng)作物水稻14’51、小麥[6-71、玉米【8月】等轉(zhuǎn)基因作物也相繼獲得成功。大豆轉(zhuǎn)基因的遺傳研究開始于1984年【1m111，在1988年Hinchee等【12】用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和McCabe等
6、【13】用基因槍法分別獲得了大豆的轉(zhuǎn)基因植株。但因大豆的組織培養(yǎng)體系尚不完善、大豆組織對農(nóng)桿菌不夠敏感等方面原因，使大豆的遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展緩慢，成為世界性難題。對大豆進(jìn)行抗病蟲基因轉(zhuǎn)移及其轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的研究，建立高效、穩(wěn)定的大豆遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，能獲得抗病蟲轉(zhuǎn)基因的大豆植株。這對防治大豆病蟲害、提高大豆品質(zhì)和產(chǎn)量具有十分重大的理論和生產(chǎn)實(shí)踐意義。1．1天花粉蛋白基因及其在植物基因工程的應(yīng)用1．1．1天花粉蛋白的基本特性天花粉蛋白(Trichosanthin，TCS)是從葫蘆科藥用植物栝樓(TrichosantheskirilowiiMaxim)塊根中分離得到，屬于I型
7、單鏈核糖體失活蛋白(RibosomeInactivatingProtein，RIP)，具有多種生物活性和藥理活性11引，是中草藥天花粉的有效成分。根據(jù)《本草綱目》的記載，天花粉的主要功效是“通月水，治胞衣不下”。天花粉蛋白(TCS)對治療早期和中期妊娠引產(chǎn)有效率達(dá)到90％以上，結(jié)晶天花粉蛋白針劑已被應(yīng)用于宮外孕、葡萄胎、異位妊娠、絨毛上皮癌等疾病的治療【15J；天花粉蛋白對乙型肝炎、乙型腦炎等7種病毒的復(fù)制均有一定的抑制作用116
8、，具有廣譜的抗病毒作用；特別是天花粉蛋白能在不影響細(xì)胞本身蛋白質(zhì)合成的情況下，抑制艾滋病病毒HIV在感染的免疫細(xì)胞內(nèi)的繁殖117】
9、。近年來的研究結(jié)果表明，天花粉蛋白和植
