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《農桿菌介導ip-10基因遺傳轉化馬鈴薯的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225RegisterCode：080063DissertationfortheDegreeofMasterStudyonAgrobacteriumMediatedPotatoTransformationof／P—loGeneCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speeiality：DateofOraIExam1lnatl‘on．University：WanPengVice—Prof．LiKuihuaMasterDevelopmentBiologyJune，
2、2008NortheastForestry萬方數(shù)據(jù)摘望摘要本論文利JtJ馬鈴薯微型磐為試驗材料，通過1i川激索組合試驗，優(yōu)化了爾農303t％種的高效再分化體系。采用農桿菌介導法將IP—lO鏨岡導入馬鈴薯基閃紐-11，并通過PCR、RT-PCR、GFP蛋白熒光檢測，驗址了H的魅兇【二!I轉入馬鈴薯基兇組。p。另外，探討了轉基因植株試管薯形成的最佳條件。1．利用馬鈴薯脫毒試管苗莖段、葉片和薯塊為試驗材料，通過IAA、NAA、GA，、IBA、6．BA、ZT的不同組合，進行了再分化試驗。結果表明，誘導莖段愈傷的最適培養(yǎng)基為：MS+IBA0．1rrl．g／L+6．
3、BA0．5mg／L，愈傷誘導率為86％；但其出芽率較低：誘導葉片再分化的最適培養(yǎng)基為：MS+ZT10．0mg／L+NAA0．1mg／L+GA3O．2mg／L，出芽率達150％；薯塊再分化最適培養(yǎng)基為：MS+IAA1．Omg／L+ZT3．5mg／L，分化率為120％。2．對農桿菌侵染并通過潮霉素篩選的轉基因植株，進行了護．，D基因和潮霉素磷酸轉移酶基因(胛71)的PCR擴增，分別獲得了276bp和602bp所需目的條帶。通過進一步的RT—PER反應和6FP熒光蛋白的激光共聚焦檢測，最終獲得3個轉基因株系。3．探討了KT、B9、CCC等激素和蔗糖濃度對轉基因
4、株系形成試管薯的影響。結果表明，當KT濃度為100mg／L，B9的濃度為150mg／L，蔗糖的濃度為8％時試管薯形成量較多，其MT／Plantlet分別為1．4，1．5和1．6，表明KT、B9和蔗糖均為轉基因試管薯誘導的可選試劑。關鍵詞馬鈴薯：遺傳轉化；IP-IG試管薯萬方數(shù)據(jù)AbstractPotatominituberwasusedaSexplantinthisstudy．AefficientregenerationsystemofcultivarDongnon9303wasoptimizedbytestingdifferenthormonecomb
5、inations．AtthesametimeIP-IOgeneWasintroducedintopotatogenomewithAgrobacteriummediatedmethod．PeR,RT-PCRandGFPfluorescencedetectionWasdonetoprovethattargetgenehadbeenconformedintopotatogenome．Inaddition，thebestconditionsoftransgenepotatomicrotuberformationWasdiscussed．1．Virus-freep
6、otatoplantletsWasusedtodoregenerationtestingbydifferentIAA，NAA，GA3，IBA，6-BAandZTcombinations．TheresultsshowedthattheoptimalmediumforcallusinductionfromstemwasMS+IBA0．1mg／L+6-BAO．5mg／Landitsinductivitywas86％，butgerminationrateWaslow；乃ebestdifferentiationmediumforleavesWaSMS+ZT10．0
7、0mg／L+NAAO．1mg／L+GA30．2mg／LandtheshootinductionrateWas150％．Ontheotherhand，theoptimaldifferentiationmediumfortuberdiscWasMS+IAA1．0mg／L+ZT3．5mg／Landthedifferentiationratereachedl20％．2．TransgenicplantswhichwereobtainedbyAgrobacteriuminfectionandhygromycinselectionwereperformedtoPCRa
8、mplificationof／P一10andhygromyeinphosphor
