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《羽衣甘藍(lán)柱頭酵母雙雜交cdna文庫構(gòu)建及arc1相互作用蛋白質(zhì)篩選》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225RegisterCode：09031DissertationfortheDegreeofMasterConstructionofyeasttwo—hybridcDNAlibraryandscreeningoftheproteinsinteractingwithARC1fromthestigmaofornamentalkaleCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof0ralExamination：Un
2、iversity：YangJiaPro．LiYuhuaMasterDevelopmentalBiologyJune，2009NortheastForestry一＼煳IIII必IIII一萬方數(shù)據(jù)!!!!!!!!!!!!!!!!!苧皇!!!竺!!!皇!!竺!!!!!!曼曼!曼!!!鼉!!!!!!!曼!!lm慢m岫I帥lmI¨mmml¨¨ml!!!!一摘要植物自交不親和性(Self-incompatibility，SI)是指雌蕊對自己和異己花粉進(jìn)行識別，通過細(xì)胞內(nèi)信號傳遞與級聯(lián)反應(yīng)，最終抑制自己花粉的生長，阻礙受精作用的過程。SI是植物
3、采取的一種促進(jìn)異交、避免自交的策略。蕓苔屬植物自交不親和反應(yīng)發(fā)生的主要部位是在柱頭乳突細(xì)胞，通過其細(xì)胞內(nèi)的信號級聯(lián)反應(yīng)抑制自我花粉的生長。目前，已經(jīng)鑒定出柱頭乳突細(xì)胞內(nèi)SI信號傳遞因子ARCl(Annrepeatcontaining1)，ARCl是一個(gè)含有U．Box功能域的蛋白，具有E3泛素連接酶活性，通過泛素／26S蛋白酶體途徑將降解其下游底物，從而導(dǎo)致SI的發(fā)生。目前，對于ARCl的下游底物和SI反應(yīng)機(jī)制還尚不清楚。本文以羽衣甘藍(lán)(Brassicaoleraceavar．a(chǎn)cephala)＆36西36自交不親和系為材料，提取柱
4、頭總RNA，通過親和層析法分離純化mRNA，利用CytoTrapXR建庫試劑盒，構(gòu)建應(yīng)用于酵母雙雜交系統(tǒng)的羽衣甘藍(lán)柱頭cDNA文庫。原始文庫的庫容量為2．5×105，擴(kuò)增后文庫的庫容量約為4×108，重組率為96％，插入片段大小在0．4．3kb之間，平均長度在0．8kb左右。構(gòu)建了ARCl全長的酵母誘餌表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化cdc25H酵母細(xì)胞對其進(jìn)行自激活檢測，經(jīng)驗(yàn)證無自激活現(xiàn)象。以CytoTrap酵母細(xì)胞質(zhì)雙雜交系統(tǒng)為操作平臺，利用共轉(zhuǎn)化的方法對羽衣甘藍(lán)柱頭酵母雙雜交cDNA文庫進(jìn)行篩選，共篩選5×105個(gè)酵母克隆，經(jīng)初步驗(yàn)證和測序得
5、到2個(gè)蛋白質(zhì)編碼序列。其中一個(gè)蛋白含有71個(gè)氨基酸，與擬南芥的Nucellin蛋白相似，一致性達(dá)79％，Nucellin蛋白是一類新的植物天冬氨酸蛋白酶，可能參與大麥?zhǔn)芫^程中胚珠珠心細(xì)胞的程序性死亡；另一個(gè)蛋白含有288個(gè)氨基酸，與擬南芥的DnaJ蛋白相似，一致性達(dá)88％，DnaJ是一類分子伴侶蛋白，是熱休克蛋白Hsp70的一個(gè)輔助蛋白，在蛋白質(zhì)的翻譯、折疊、去折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)和降解過程中發(fā)揮重要作用。以上研究為探討ARCl的功能及S1分子機(jī)制提供新的線索。關(guān)鍵詞羽衣甘藍(lán)；自交不親和；ARCl；酵母雙雜交；cDNA文庫萬方數(shù)據(jù)Abst
6、ractSelf-incompatibility(SI)allowsthepistiltodistinguishbetweenselfandnon．selfpollensofthesamespeciesandrejectselforself-relatedpollens．Manyfloweringplantshaveevolvedthisphysiologicalstrategytopreventinbreedingandmaintaingeneticdiversityinapopulation．Thestigma，inwhich
7、theself-incompatibilityreactiontakesplace，Caninhibitthegrowthanddevelopmentofself-pollenthroughsignalingcascaderesponseinpapillarcellinBrassica．Armrepeatcontaining1(ARC1)，astigmaticU-boxproteinwithE3ubiquitinligaseactivity,functionsasapositivemediatorofSIsignaling．How
8、eveLlittleisknownaboutsubstratesoftheARClintherejectionofincompatiblepollenduringtheSIresponse．Ornamentalkale(Brassicaolerac
