leptin在肝臟缺血再灌注損傷中的變化規(guī)律與其重組、表達(dá)

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1、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩十學(xué)位論文英文縮寫詞索引一軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩十學(xué)位論文英文縮寫詞索引二軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院研究生學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明．秉承我院“敬業(yè)、勤奮、求實(shí)、創(chuàng)新”的學(xué)風(fēng)，本人聲明：所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位及證書(shū)而使用過(guò)的材料，對(duì)本文的研究作出貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中做了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一

2、切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：枷指導(dǎo)教師簽名：嬲閨R期：力’7?？?z；只期：≯，哆一廣一≥-，研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院或解放軍總醫(yī)院。學(xué)院有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文原件、復(fù)印件和電子版本，可以采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文以供被查閱和借閱。學(xué)院可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)。論文作者簽名：弛礎(chǔ)只期：二力，^，≯指導(dǎo)教師簽名：籠孵犖同同期：≯矽一一．，一：，礦軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩十學(xué)位論文第一部分肝臟缺

3、血一再灌注損傷對(duì)大鼠Leptin蛋白及mRNA表達(dá)水平的影響中文摘要目的：建立大鼠肝臟缺血一再灌注(Isch鈿ia—Reperfusion，I／R)損傷模型，探討大鼠肝臟[／R損傷時(shí)血清Leptin蛋白及脂肪組織LeptinmRNA水平的變化規(guī)律，探討影響血清Leptin水平變化的因素，以及此變化規(guī)律對(duì)機(jī)體的影響．方法：將45只體重2209左右的雄性sD大鼠隨機(jī)分為5組，第一組為假手術(shù)組(Sham組)，第二紐為肝臟缺血60min，再灌注60min(160R60)組，第三組為160R150組，第四組為16

4、0R240組，第五組為160R360組．麻醉后，在門靜脈分出發(fā)向肝臟尾葉的分支上，以動(dòng)脈夾夾閉肝動(dòng)脈、門靜脈及膽管，建立大鼠肝臟70％I／R損傷模型．動(dòng)脈夾置入后，關(guān)閉腹腔。缺血60min后，取出動(dòng)脈夾進(jìn)行再灌注。采用高靈敏鼠Leptin放射免疫分析法測(cè)定血清Leptin濃度變化，并采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)方法檢測(cè)脂肪組織Leptinml【NA表達(dá)水平的變化．結(jié)果：(1)與Sham組(12．01±2．73ng／ml湘比，160R60糾17．77±5．61ng／m1)和160R150組(1

5、7．26±6．13ng／m1)血清Leptin濃度即出現(xiàn)增高趨勢(shì)，160R360組(19．54土6．04ng／m1)血清Leptin濃度顯著增高(q一4．39，P<0．05)．(2)與Sham組相比，160R60組．160R150組和160R240組LeptindNA表達(dá)水平無(wú)明顯改變，160R360組LeptinmI【NA表達(dá)水平降低(輝度比值q一4．56，P<0．05)。結(jié)論：大鼠70％肝臟缺血一再灌注損傷模型建立成功。Leptin作為一種炎性因子，參與了大鼠肝臟I／R損傷的病理生理改變過(guò)程。大鼠血

6、清Leptin濃度在肝臟i／g損傷早期和中期呈升高趨勢(shì)，但脂肪組織LeptinmRNA表達(dá)水平在損傷后期呈下降趨勢(shì)?！娟P(guān)鍵詞l缺血預(yù)處理，再灌注損傷，肝臟；Leptin；放射免疫分析法；逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)2軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩十學(xué)位論文第二部分重組人Leptin的表達(dá)、純化及免疫學(xué)與生物學(xué)活性鑒定中文摘要目的：為了獲得重組人Leptin(rh—leptin)蛋白高表達(dá)的菌株及大量具有生物活性的rh-leptin蛋白，構(gòu)建Leptin重組表達(dá)載體，篩選陽(yáng)性質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)茵進(jìn)行表達(dá)，對(duì)rh-leptin蛋白

7、進(jìn)行復(fù)性及純化，并鑒定其免疫學(xué)及生物學(xué)活性．方法：提取脂肪組織KNA，通過(guò)RT-PCR方法獲得用PCR方法擴(kuò)增人Leptin的編碼區(qū)，使產(chǎn)物與pGEM-Teasy裁體相連，轉(zhuǎn)染DH5ft．．測(cè)序后，選出陽(yáng)性克隆質(zhì)粒擴(kuò)增。將酶切后的leptin片段與pET一28a(+)載體連接，獲得leptin的表迭質(zhì)粒。將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21(DE3)，測(cè)序結(jié)果顯示Leptin編碼區(qū)沒(méi)有突變產(chǎn)生，用IPTG誘導(dǎo)leptin重組蛋白表達(dá)．表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳及Western印跡雜交進(jìn)行免疫學(xué)分析。并通過(guò)K

8、m小鼠減肥實(shí)驗(yàn)及胃腸推進(jìn)率測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其生物學(xué)活性．結(jié)果：在包涵體蛋白22kDa處有明顯的新增蛋白帶，其含量超過(guò)總蛋白的50％；經(jīng)Western-blot證實(shí)為重組的人leptin蛋白．大量表達(dá)后，經(jīng)蛋白復(fù)性和純化，通過(guò)Km小鼠減肥實(shí)驗(yàn)及胃腸推進(jìn)率測(cè)定實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組表達(dá)的人Leptin蛋白具有生物學(xué)活性．結(jié)論：成功構(gòu)建了rh—leptin的高表達(dá)菌株，建立了rh—leptin的純化與復(fù)性方法，經(jīng)驗(yàn)證表達(dá)產(chǎn)物具有免疫學(xué)及生物學(xué)活性，可供進(jìn)一步基