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《肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白（lcmr1）相互作用蛋白的初步篩選》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩士學(xué)位論文英文縮略詞表英文縮寫英文全稱中文詞義LCMRILungc砒ic．el"metastasis-relatedprotein1肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1PCRPolymerasechainreaction聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)mRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸DNADeoxyribonucleicacid脫氧核糖核酸eDNAComplementarydeoxyribonucleicacid互補(bǔ)脫氧核糖核酸UASUpstreamactivationsequence上游激
2、活序列BDBindingdomainDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域ADActivationdomain轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域MCSMultiplecloningsite多克隆位點(diǎn)dNTPDeoxy-ribonucleosidetriphosphate三磷酸脫氧核(糖核)苷ODOpticaldensity光密度E嘰AEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸LiAcLithiumacetate醋酸鋰PEGPolyethyleneglycol聚乙二醇3-AT3-amino-1，2，4．mazole三氨
3、基三唑SDSSodiumdodecylsulphate十二烷基硫酸鈉PAGEPolyacrylanminegeleleetrophoresis聚丙烯酰胺凝膠電泳PVDFPolyvinylidenedifluoride聚二氟乙烯DMSODimethylsulfoxide二甲亞砜PMSFPhenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物BSABovine8eruinalbumin牛血清白蛋白KDKilodalton千道爾頓bpBasepair堿基對rpmRevolutionperminu
4、te每分鐘轉(zhuǎn)速M(fèi)Moleperliter摩爾每升軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院研究生學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明秉承我院“敬業(yè)、勤奮、求實、創(chuàng)新”的學(xué)風(fēng)，本人聲明：所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位及證書而使用過的材料，對本文的研究作出貢獻(xiàn)的個人或集體，均已在文中做了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授
5、權(quán)書本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院或解放軍總醫(yī)院。學(xué)院有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文原件、復(fù)印件和電子版本，可以采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文以供被查閱和借閱。學(xué)院可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)。論文作者簽名：編日期：夥n乒料刻磴氧膨澎：節(jié)，節(jié)叼唧蜘黼軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩士學(xué)位論文肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白(LCMRl)相互作用蛋白的初步篩選中文摘要目的：肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白l(1ungcancel"metastasisrelatedprotein1，
6、LCMRl)的編碼基因是我們實驗室采用mRNA差異顯示技術(shù)克隆到的新基因(GenBankID：AYl48462)，目前功能不明確，為了研究該基因的功能，我們采用酵母雙雜交系統(tǒng)從預(yù)轉(zhuǎn)化人肝文庫篩選LCMRl的相互作用蛋白，為進(jìn)一步研究該基因的功能提供線索．方法：(1)PCR擴(kuò)增pGEX-5T-LCMRl載體中的LCMRl編碼區(qū)序列，通過引入EcoRI和PstI內(nèi)切酶住點(diǎn)，將LCMRl編碼區(qū)克隆到酵母雙雜交系統(tǒng)中的pGBKT7載體，得到誘餌質(zhì)粒pGBKT7-LCMRl，轉(zhuǎn)化酵母茵AHl09后，檢測BD-LMC
7、Rl融合蛋白的表達(dá)，LCMRl蛋白的轉(zhuǎn)錄激活活性及對宿主茵AHl09的毒性；(2)轉(zhuǎn)化了誘餌質(zhì)粒pGBKT7-LCMRl的酵母菌AHl09與轉(zhuǎn)化了人肝文庫質(zhì)粒的酵母菌Y187進(jìn)行交配培養(yǎng)，利用營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基，初步篩選陽性克?。?3)重復(fù)檢測報告基因的表達(dá)和去除陽性克隆中多余的質(zhì)粒；(4)提取陽性克隆中的質(zhì)粒DNA，用PeR和酶切的方法減少重復(fù)克隆，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH乩，利用含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基篩選AD文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化子，提取^D文庫質(zhì)粒；(5)將pCBKTT-LCMRl質(zhì)粒和^D文庫質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母菌A
8、Hl09，轉(zhuǎn)化混合物鋪板于營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基，再次驗證其相互作用；(6)陽性克隆中AD文庫質(zhì)粒測序及生物信息學(xué)分析．結(jié)果：(1)PCR和測序鑒定pGBKT7一LCMRl載體構(gòu)建成功，轉(zhuǎn)化AHl09，BD-LCMRl融合蛋白成功表達(dá)，LCMRl蛋白無轉(zhuǎn)錄激活活性和宿主毒性；(2)通過文庫篩選得到72個陽性克?。?3)經(jīng)報告基因激活檢測．多余質(zhì)粒去除剩余57個克?。?4)經(jīng)酶切歸類獲得30陽性克??；(5)共轉(zhuǎn)化再次驗證相互作用后仍為陽
