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《小鼠es細胞的定向誘導分化和建系實驗的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、浙江入學壩l‘論_jc=略語AgarAKPBRLeellBSACLSMDMEMDMSOEBsEC細胞EDTAEGFES細胞FCSFGFFITCGABAGelatinGFPGluHCGICMsMAP．2MEFmLIFNBSNestin略語表中文全稱軟瓊脂堿性磷酸酶Buffalo大鼠肝臟細胞牛血清蛋白激光共聚焦顯微鏡Dulbecco改良培養(yǎng)基二甲亞砜胚體胚胎癌細胞乙二胺四乙酸表皮生長因子胚胎干細胞胎牛血清成纖維細胞生長因子異硫氰酸熒光素Y一氨基丁酸明膠綠色熒光蛋白谷氨酸人絨毛膜促性腺激素內(nèi)細胞團微管相關蛋白一2小鼠成纖維細胞小鼠白血病抑制因子新生牛血清巢蛋白．4．英文全稱alkalinephos
2、phataseBuffaloratliveeellbovineserulnalbuminconfocallaserscanningmicroscopyDulbecco’SmodifiedeaglemediumdimethylsulphoxideembryonicbodiesembryoniccarcinomacellsethylenedisminetetraaceticacidepidermalgrowthfactorembryonicstemcellfetalcalfserumfibroblastgrowthfactorfluoresceinisothiocynateY—aminobuty
3、ricacidgreenfluorescentproteinglumaticacidhumanchorionicgonadotropininnereellmassesmicrotubule·associatedprotein2mouseembryofibroblastmouseleukemiainhibitoryfactornewbovineserum浙江人學顧I：論文NF．MNGFNMDAPEPOCsPI-ISCPMSGRASCFSSEA．1TOF．BlTrypsinTSC神經(jīng)絲．M神經(jīng)生長因子N．甲基．D一門冬氨酸藻紅蛋白原始生殖細胞多能造血干細胞孕馬血清促性腺激素維甲酸(視黃酸／維生素
4、A酸)干細胞因子時期專一性胚胎抗原一l轉(zhuǎn)化生長因子B一胰蛋白酶畸胎瘤干細胞neurofilament-MneuralgrowthfactorN·methyl—D·aspartatephycoerthrinprimordialgermcellspluripotentialhematopoieticstemcellpregnantmare’sselRlmgonadotropinretinoicacidstemeellfactorstage-specificembryonicantigen·1transforminggrowthfactor13teratocarcinomastemcells浙江人
5、學傾卜論史摘要近年來，胚胎干細胞(EScells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等諸多優(yōu)點，已經(jīng)成為醫(yī)學和生命科學領域研究的熱點之一。研究者們試圖用Es細胞建立糖尿病、老年型癡呆、帕金森氏癥等遺傳疾病轉(zhuǎn)基因動物模型。在這些研究中，最關鍵的是ES細胞的來源和定向誘導分化問題。進行一系列研究必須要有足夠的ES細胞，特別是建立轉(zhuǎn)基因動物模型，需要lO代以內(nèi)的ES細胞；而用作細胞治療研究也必須解決其他分化細胞的影響問題。在我們的實驗中，以小鼠Es—D3細胞系為對象，通過細胞培養(yǎng)大量增殖未分化細胞，再用兩種方法進行ES細胞向神經(jīng)細胞的誘導分化實驗。首先從胚體(EBs)本身探討ES細胞內(nèi)部調(diào)控誘導分化
6、的機制，用懸浮培養(yǎng)、懸滴培養(yǎng)、懸浮轉(zhuǎn)懸滴培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出不同時間的EBs，再加以RA處理，觀察比較EBs對ES細胞神經(jīng)分化的影響；在此基礎上．用不同濃度的RA處理EBs，分析誘導荊RA對Es細胞神經(jīng)分化的影響。結(jié)果表明，用10-6M的RA處理懸滴培養(yǎng)3d轉(zhuǎn)懸浮培養(yǎng)1d的EBs4d，能得到較高的神經(jīng)分化比例。同時，為以后開展轉(zhuǎn)基因動物模型的研究，我們還進行了小鼠ES細胞建系的部分工作。以ICR小鼠和昆明小鼠為實驗對象，采用超數(shù)排卵的方法獲得小鼠胚胎，培養(yǎng)在用絲裂霉素C處理過的ICR小鼠和昆明小鼠MEF細胞飼養(yǎng)層上，選取適當時I'HJ離散增賄的ICM和類Es細胞集落，分析了在小鼠ES細胞建系過程
7、中，飼養(yǎng)層細胞、消化液及不同品系來源的胚胎的影響。從實驗結(jié)果來看，ICR小鼠和昆明小鼠兩種來源的飼養(yǎng)層細胞對胚胎貼壁、ICM增殖無影響，消化液作用影響明顯，以0．125％trypsin+0．02％EDTA消化10--15min為宜。以上結(jié)果表明：1CR小鼠比昆明小鼠更易進行ES細胞的建系工作。關鍵詞：胚胎干細胞(ES細胞)神經(jīng)細胞胚體(EBs)維甲酸(RA)內(nèi)細胞團(ICM)類ES細胞集落浙江人學硼I‘論文A
