磁性免疫層析技術(shù)在氯霉素殘留快速檢測(cè)中的應(yīng)用研究論文

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1、AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceDevelopmentofMagneticLateralFlowImmunoassaysforRapidDetectionofChloramphenicolResiduesCandidate:HuangWeiMajor:PharmaceuticalEngineeringSupervisor:Dr.YangHaiHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074，P.R

2、.ChinaMay2012獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可

3、以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要在食品安全事故頻發(fā)的今天，食品安全問(wèn)題更加受到人們的關(guān)注，同時(shí)也對(duì)食品安全檢測(cè)技術(shù)提出了更高的要求。氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作為一種廣譜抗生素，因其價(jià)廉高效，曾作為藥物應(yīng)用于人和動(dòng)物細(xì)菌性疾病的治療，并作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、水產(chǎn)業(yè)。現(xiàn)已證明，氯霉素對(duì)機(jī)體有很大的毒副作用，因此世界上許多國(guó)家明令禁止將此藥用于可食用性動(dòng)物。歐盟對(duì)氯霉

4、素的檢測(cè)限由原來(lái)的10μg/kg降至0.1μg/kg，比原標(biāo)準(zhǔn)要求提高了100倍；美國(guó)FDA規(guī)定的檢出限也由原來(lái)的5μg/kg降為了0.3μg/kg。為了嚴(yán)格監(jiān)控氯霉素的使用，抑制氯霉素引起的食品安全問(wèn)題的發(fā)生，建立高效、靈敏、經(jīng)濟(jì)的氯霉素殘留分析方法很有必要。磁性免疫層析法（magneticlateralflowimmunoassays，MLFIAs）作為快速檢測(cè)方法的新秀，以超順磁性微球代替?zhèn)鹘y(tǒng)的膠體金作為信號(hào)標(biāo)記物，即可以通過(guò)肉眼觀察或光學(xué)比色法實(shí)現(xiàn)快速定性分析，又可以進(jìn)一步利用超順磁材料特殊的磁信號(hào)實(shí)現(xiàn)免疫層析技術(shù)的定量化檢測(cè)。本論文考查了幾種不同來(lái)源的超順磁性納米微

5、球，篩選了適用于免疫層析分析的磁球，研究?jī)?yōu)化了磁性免疫層析條件，建立了一種將免疫磁分離與免疫磁層析相結(jié)合的磁性免疫層析快速檢測(cè)新方法，并將其用于氯霉素殘留的快速檢測(cè)。主要研究?jī)?nèi)容包括：1)篩選出適合進(jìn)行磁性免疫層析的磁性納米粒：主要對(duì)8種不同來(lái)源超順磁性微球的性能進(jìn)行了對(duì)比，選擇出了適合進(jìn)行磁性免疫層析的磁球A和磁球D。2)優(yōu)化了磁微粒免疫層析條件：比較了磁球A和磁球D在不同鹽濃度和pH下的性能差異。研究了不同上樣緩沖液配方對(duì)磁球展層的影響，發(fā)現(xiàn)表面活性劑和高濃度蛋白對(duì)于磁球的展層具有明顯促進(jìn)作用，磁球A在0.05%以上的Tween20中就可以完全展層，在5%以上的BSA中就

6、可以部分展層，后使用含5%BSA和1%Tween20的0.01MPBS作為上樣緩沖液。研究了干I華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文燥對(duì)磁球展層的影響，發(fā)現(xiàn)干燥后的磁球更趨向于團(tuán)聚。由于磁球D同小鼠IgG的偶聯(lián)物，會(huì)發(fā)生團(tuán)聚而影響展層，故最終選用磁球A開(kāi)展氯霉素殘留檢測(cè)方法研究。3)建立了氯霉素殘留的磁性免疫層析檢測(cè)新方法：從磁球與抗氯霉素單抗的偶聯(lián)條件，T點(diǎn)、C點(diǎn)的包被條件，及免疫磁分離技術(shù)用于樣品處理等條件，對(duì)氯霉素的檢測(cè)進(jìn)行了優(yōu)化。選擇CB作為包被緩沖液，C點(diǎn)的GAM最佳包被濃度為1:100倍稀釋?zhuān)琓點(diǎn)為1:5倍稀釋。磁球：mAbCAP最佳偶聯(lián)比為100:1。100:1的偶聯(lián)比與2

7、5:1的比較，CAP檢測(cè)限由10ng/mL降低到了4ng/mL以下。建立了使用磁分離的方法處理大體積樣品的方法。本研究建立了一種將免疫磁分離與免疫磁層析相結(jié)合的磁性免疫層析快速檢測(cè)新方法，使用氯霉素作為檢測(cè)對(duì)象，并與本課題組自制的光學(xué)成像分析儀相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)氯霉素殘留的快速半定量檢測(cè)。這些研究工作也將為今后發(fā)展免疫層析磁顆粒的磁信號(hào)定量檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：磁性納米粒；免疫層析；氯霉素；快速檢測(cè)；食品安全I(xiàn)I華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractAlongwiththefrequentfoodsafet