漢坦病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆、序列分析和表達研究

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1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名：豳洼紐日期：墊翌：蘭：蘭2關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的印刷件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可

2、以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名：啕堡塹導(dǎo)師簽名：始山東大學(xué)博士學(xué)位論文漢坦病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆、序列分析和表達研究專業(yè)：流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)博士生：陶澤新導(dǎo)師：王志玉教授中文摘要漢坦病毒(hantavirus，HV)屬于布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬。在臨床上引起腎綜合征出血熱(hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome，HFRS)和漢坦病毒肺綜合征(hantavimspulmonarysyndr

3、ome，HI'S)。漢坦病毒共有30多種基因型和血清型，但中國目前為止僅發(fā)現(xiàn)漢灘型(Hanlaan，HTN)、漢城型(Seoul，SEO)和普馬拉型(Puumala，PUU)，均為HFRS的病原體。HFRS臨床上以發(fā)熱、出血和腎損害為主要特征，它包括朝鮮出血熱、流行性出血熱和流行性腎病，每年在歐洲和亞洲有近10萬病例發(fā)生。較早的報道可追溯到蘇聯(lián)在1913和1932年，日本軍隊1932年在滿洲里，瑞典在1934年的暴發(fā)流行。自從1978年李鎬汪等從疫區(qū)的黑線姬鼠肺組織中分離到漢坦病毒76-118株以來，各國學(xué)者

4、相繼分離到不同型別的漢坦病毒。引起HFRS的漢坦病毒包括HTN型、SEO型、多不拉伐一貝爾格萊德型(Dobrava，DOB)和PUU型，分別引起重度、中度和輕度的臨床癥狀。1993年ItPS首先在美國的四角地區(qū)暴發(fā)，臨床上早期出現(xiàn)發(fā)熱、寒戰(zhàn)等前驅(qū)癥狀，然后是突發(fā)性的呼吸困難，嚴重者導(dǎo)致死亡，病死率高，震驚了美國的公共衛(wèi)生官員和病毒學(xué)家。研究表明該病毒病原為SN型漢坦病毒，由鹿鼠攜帶，隨后又從不同地區(qū)的HPS病人體內(nèi)分離到NY、BCC、BAY、AND等不同型別漢坦病毒。在我國尚未有HPS病例的報道。各種鼠類是漢

5、坦病毒重要的宿主和傳染源，他們各自攜帶不同的型別漢坦病毒。攜帶HTNV的黑線姬鼠主要在東亞和東歐，攜帶DOBV的黃頸喉姬鼠出現(xiàn)在南斯拉夫及鄰近地區(qū)，攜帶PUUV的歐洲棕背鼠存在于西北歐地區(qū)，而由褐家鼠攜帶的SEOV在世界范圍內(nèi)廣泛存在。7山東大學(xué)博士學(xué)位論文漢坦病毒引起的HFRS在我國發(fā)病率高，是重點防治的傳染病之一。中國HFRS病人總數(shù)占世界發(fā)病人數(shù)的90％以上，每年新發(fā)病例數(shù)4～6萬。而山東省是HFRS的高發(fā)省份，年發(fā)病人數(shù)在我國常年位于前3位，2003年前則為全國第一位。山東省己發(fā)病例數(shù)占全國總病例數(shù)的

6、1／3?？梢娚綎|省防治HFRS的工作具有極為重要的現(xiàn)實意義。山東引起HFRS的漢坦病毒以SEO型為主，也有HTN病毒存在，是混合疫區(qū)。對HFRS的診斷和防治歸根結(jié)底取決于對其病原學(xué)的研究進展，包括病毒分離、病毒基因及蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的研究、分子流行病學(xué)、新型疫苗、新型診斷試劑的研究與開發(fā)等，其中對漢坦病毒的基因進行分析和分子流行病學(xué)研究又是最根本和最基礎(chǔ)的研究。而山東省分離全片段測序的病毒株太少，對它們的分子生物學(xué)性質(zhì)尚缺乏深入研究。漢坦病毒顆粒為圓形或卵圓形，外層是包膜，表面有突起，由G1和G2糖蛋白(g

7、lycoprotein，GP)組成。包膜內(nèi)為病毒核酸、核衣殼蛋白(nucleocapsidprotein，NP)和RNA聚合酶組成的核衣殼，病毒體中核衣殼蛋白成分很高。病毒基因組為單股負鏈RNA，由長(L)、中(M)、短(s)三個節(jié)段組成，分別編碼依賴RNA的RNA多聚酶，G1和G2包膜糖蛋白和核衣殼蛋白。G1、G2包膜糖蛋白對病毒的致病性起重要作用，包含了病毒的中和抗原位點、受體結(jié)合位點、融合肽和血凝位點。M片段中G1、G2的編碼順序為NH2．G1．G2．COOH。M片段首先編碼產(chǎn)生一個126kD的糖蛋白前

8、體(glycoproteinprecursor，GPC)，然后在翻譯的同時被細胞內(nèi)的信號肽酶切割成G1、G2兩個蛋白，組成異二聚體表達在內(nèi)膜系統(tǒng)，部分轉(zhuǎn)運至細胞膜表面，切割位點為一段絕對保守的WAASA的氨基酸序列。G1、G2共表達是二者在胞內(nèi)有效轉(zhuǎn)運和行使功能的基礎(chǔ)。G1、G2富含半胱氨酸殘基，維持了異源二聚體在內(nèi)膜系統(tǒng)管腔內(nèi)高度有序的空問結(jié)構(gòu)。G1、G2蛋白共有5～7個N一連糖基化位點，在二聚體