豬藍(lán)耳病病毒nsp2基因主要抗原區(qū)域的原核表達(dá)與間接elisa檢測(cè)方法的建立

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1、2．6Westernblot分析??????????????????????????????????．443討論?????????????????????????????????????????453．1目的基因片段的選擇與擴(kuò)增???????????????????????????453．2pET-dNSP2重組表達(dá)載體的構(gòu)建?????????????????????????453．3關(guān)于重組蛋白的表達(dá)?????????????????????????????????453．4表達(dá)條件的優(yōu)化???????????

2、?????????????????463．5重組蛋白的表達(dá)量及抗原性鑒定??????????????????????．47試驗(yàn)二PRRSV間接ELISA檢測(cè)方法的初步建立???????????????????．48l材料與方法????????????????????????????????．481．1材料?????????????????????????????????????????????．481．1．1主要試劑及血清樣品???????????????????????????481．1．2主要儀器設(shè)備????

3、????????????????????????????481．1．3用于蛋白純化溶液的配制???????????????????????????481．1．4ELISA所用溶液?????????????????????????????．．491．2方法???????????????????????????????????????．501．2．1重組蛋白的大量誘導(dǎo)表達(dá)????????????????????????????501．2．2目的蛋白存在情況檢測(cè)??????????????????????????501

4、．2．3鎳柱的處理???????????????????????????????501．2．4鎳柱的再生??????????????????????????????一501．2．5目的蛋白的純化????????????????????????????．．511．2．6純化蛋白的濃縮????????????????????????????．5l1．2．7重組蛋白濃度的測(cè)定及抗原性的測(cè)定??????????????????????．521．2．8重組蛋白間接ELISA檢測(cè)方法的初步研究????????????????

5、?．．522結(jié)果??????????????????????????????????????????542．1重組蛋白的制備及純化????????????????????????．542．2純化蛋白濃度測(cè)定??????????????????????????????552．3間接ELISA方法的初步建立???????????????????????????．．563討論??????????????????????????????????????????????．633．1目的蛋白存在形式檢測(cè)???????????

6、????????????????．．633．2重組蛋白的純化?????????????????????????????633．3間接ELISA方法的建立?????????????????????????????．633．4PRRSVNSP2間接ELISA方法建立的意義???????????????????????．65全文總結(jié)?????????????????????????????????．66參考文獻(xiàn)?????????????????????????????????．67致謝?????????????????

7、??????????????????????????????．79ContentsAbstract????????????????????????．??????????????????????．．1Englishabstract??．．?．?．．??．?．．．?????．．．．．．???．．．．??．????．．??．??．?????．????3AbbreviationKey．???．．．．．．．．．．????．．．．．．??．?．．．．．．．．．．．????????．．．．．．．．．?．．．?．．．．．．．??

8、?．?．．．5Summary???????????????????????????????????????61SummaryForeword???????????????????????????????????????．62BiologicalcharacteristicsofPRRSV??????????????????????????????63Advanceinmo