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《il17在骨髓干細胞促進肝損傷修復(fù)中的作用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文血管介入回輸至患者肝動脈。針對失代償期肝硬化患者的臨床隨機對照研究表明，與僅接受G-SCF處理的患者相比，接受自體干細胞移植的患者肝功能顯著提高。至2012年12月，我們對416例失代償期肝硬化患者進行了自體干細胞移植治療，隨訪結(jié)果表明，干細胞治療顯著提高了患者的3年生存率（87%，對照組為29%）。我們對42例接受干細胞移植治療的患者進行了免疫相關(guān)指標的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在干細胞治療后第1、3、6、9、12月，患者外周血IL-17水平呈持續(xù)下降趨勢，并與患者肝功能指標的變化呈正相關(guān)。提示IL-17可能與BMSCs
2、促進肝功能恢復(fù)有關(guān)。本研究將采用四氯化碳（Carbontetrachloride,CCl4）制備小鼠肝損傷模型，并對肝損傷小鼠進行同源BMSCs移植治療。利用這一模型，探討IL-17在CCl4誘導(dǎo)小鼠肝損傷和BMSCs改善肝損傷過程中的作用，為闡明BMSCs促進肝病患者肝功能恢復(fù)的機理提供理論依據(jù)?！灸康摹?.明確IL-17在CCl4誘導(dǎo)小鼠肝損傷中的作用；2.闡明IL-17在BMSCs促進小鼠肝損傷修復(fù)中的作用?！痉椒ā?.采用CCl4腹腔注射誘導(dǎo)小鼠肝損傷。在肝損傷誘導(dǎo)過程中，H&E和天狼星紅染色檢測小鼠肝臟炎癥和纖維化程度，血漿生
3、化檢測丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（alanineaminotransferase,ALT）、白蛋白（albumin,ALB），同時采用ELISA檢測小鼠外周血IL-17水平，Real-timePCR檢測小鼠肝組織表達促炎因子IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ、IL-17A、IL-17F以及IL-17RA和IL-17RC的水平，流式細胞術(shù)檢測肝內(nèi)單核細胞中Th17細胞的百分比；2.給予特異性抗小鼠IL-17抗體（Anti-IL-17mAb）或重組小鼠（Rm）IL-17干預(yù)CCl4誘導(dǎo)小鼠肝損傷過程，H&E和天狼星紅染色檢測小鼠肝臟炎癥和纖維化程
4、度，血漿生化檢測ALT、ALB，Real-timePCR檢測肝纖維化相關(guān)因子基質(zhì)金屬蛋白酶3（Matrixmetalloproteinase3,MMP3）、金屬蛋白酶組織抑制劑1（Tissueinhibitorofmetalloproteinase1,TIMP1）和TGF-β1的表達，免疫組化、Real-timePCR-4-第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文和Westernblot檢測肝組織表達α-SMA的情況；63.將同品系小鼠BMSCs經(jīng)尾靜脈移植給CCl4誘導(dǎo)的肝損傷小鼠（5×10BMSCs/只），采用ELISA檢測小鼠外周血IL-17水平
5、，Real-timePCR檢測小鼠肝組織IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC及IL-23p19的表達水平，流式細胞術(shù)檢測肝內(nèi)單核細胞中Th17細胞的百分比；4.給予Anti-IL-17mAb和RmIL-17因子干預(yù)BMSCs治療CCl4誘導(dǎo)小鼠肝損傷的過程，H&E和天狼星紅染色檢測肝組織炎癥和纖維化程度，Real-timePCR檢測肝內(nèi)膠原層蛋白collagen-1的表達，血清生化檢測小鼠肝功能（ALT和ALB水平）?！窘Y(jié)果】1.IL-17與小鼠肝損傷過程密切相關(guān)H&E、天狼星紅染色和血清生化檢測結(jié)果顯示，連續(xù)6周
6、CCl4腹腔注射成功誘導(dǎo)出小鼠肝損傷模型，表現(xiàn)為肝組織內(nèi)大量炎性細胞浸潤、纖維化形成，外周血ALT升高而ALB水平顯著降低。ELISA、Real-timePCR和流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，在CCl4誘導(dǎo)肝損傷過程中，外周血IL-17水平和肝組織內(nèi)IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC、IL-6、IL-8、TNF-α的表達水平逐漸升高，而肝組織內(nèi)Th17細胞百分比和IFN-γ的表達水平無明顯變化。當撤除CCl4后，小鼠肝損傷逐漸恢復(fù)，外周血IL-17水平和肝組織內(nèi)IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC、I
7、L-6、IL-8、TNF-α的表達水平也逐漸恢復(fù)至幾乎正常。2.IL-17促進CCl4誘導(dǎo)小鼠肝損傷在用CCl4制備小鼠肝損傷過程中，和僅給予CCl4腹腔注射組相比，聯(lián)合注射RmIL-17能顯著加重小鼠肝損傷，而聯(lián)合注射Anti-IL-17mAb卻顯著減輕CCl4誘導(dǎo)的肝損傷。Real-timePCR、免疫組化和Westernblot結(jié)果顯示，與單純使用CCl4相比，聯(lián)合使用CCl4和RmIL-17顯著增加了肝組織內(nèi)MMP3、TIMP1、TGF-β1、α-SMA的表達，而聯(lián)合使用CCl4和Anti-IL-17mAb卻抑制了MMP3、TI
8、MP1、TGF-β1、α-SMA的表達。3.同源BMSCs下調(diào)小鼠IL-17表達水平同源BMSCs移植治療能有效改善CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷。在BMSCs促進肝損傷恢復(fù)的同時，小鼠外周血IL-17水平也明顯
