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《il17在con a誘導的自身免疫性肝損傷中的作用及其機制分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、IL一17在ConA誘導的自身免疫性肝損傷中的作用及其機制研究中文摘要出現(xiàn)炎性細胞浸潤。另外，我們檢測了模型小鼠血清中TNF一a和IL一6的水平，作為導致組織損傷最重要的細胞因子TNF一a和IL一6在ConA處理組顯著升高。因此通過以上結果證明我們成功誘導了肝損傷，建立了ConA誘導的自身免疫性肝損傷模型。為了了解IL一17在本模型中是否起作用，我們利用TaqMan探針的實時熒光定量PCR和ELIsA技術檢測了IL一17在模型小鼠肝組織中的表達變化情況，同時比較了IL一17的表達水平與肝臟損傷程度的相關性。實驗結果表明，IL一17在ConA誘導的免疫性肝
2、損傷組織中顯著上調(diào)表達，IL一17表達水平與肝臟損傷程度正相關，提示IL一17表達與免疫性肝損傷具有一定的相關性，IL一17的上調(diào)表達可能參與了免疫性肝損傷的病理發(fā)生。第二部分IL一17在conA誘導的自身免疫性肝損傷中的作用通過第一部分的實驗證明在ConA誘導的自身免疫性肝損傷小鼠肝臟局部，IL一17增多。在本部分中，我們著重研究IL一17在本模型中所起的作用。首先，我們進行了特異性IL一17單克隆抗體的體內(nèi)阻斷實驗，觀察肝臟病理變化，檢測ALT水平、TNF一a和IL一6表達變化，評估抗IL一17單克隆抗體對ConA誘導的自身免疫性肝損傷的影響，初步探
3、討它的可能機理。實驗結果表明，特異性IL一17單克隆抗體干預明顯降低了血清ALT水平(p<0.05)、改善了肝臟病理損傷、降低了肝臟組織中促炎癥物質(zhì)如TNF一a和IL一6的表達水平。這些實驗資料說明，抗IL一17單克隆抗體對ConA誘導的自身免疫性肝損傷具有明顯的保護作用，IL一17促進相關的炎癥細胞因子TNF一a和IL一6的釋放可能是導致肝臟損傷的重要機制之一。其次，為了進一步了解內(nèi)源性IL一17在ConA誘導的急性肝損傷中的作用，我們用表達可溶性的IL一17R:Fc融合蛋白重組腺病毒載體(AdlL一17R:Fc)處理小鼠。這種融合蛋白可以與IL一17
4、R結合，從而阻斷IL一17的傳導通路。結果顯示，經(jīng)可溶性的IL一17R:Fc融合蛋白重組腺病毒載體處理后，血清中轉(zhuǎn)氨酶水平明顯降低同時肝細胞壞死減輕。同時，與肝損傷水平相平行，可溶性的IL一17R:Fc融合蛋白重組腺病毒載體阻斷IL一17與其受體結合后，TNF一a和IL一6明顯下降。以上結果提示，阻斷IL一17信號通路可以明顯地減輕ConA誘導的急性肝損傷，并且此過程與阻斷了在本模型中重要的細胞因子TNF一。和IL一6相關。最后，我們構建了含有細胞因子IL一17的真核表達質(zhì)粒。我們以鈣轉(zhuǎn)法將質(zhì)粒導入Huh7細胞，獲得含IL一17轉(zhuǎn)染細胞。將以上轉(zhuǎn)染細胞的
5、表達上清濃縮后進行ELISA分析可見明顯IL一17表達，證實以上所構建的重組質(zhì)粒能夠在體外進行有效表達。體內(nèi)實驗顯示:該質(zhì)粒注射小鼠后，小鼠體內(nèi)的IL一17明顯升高。以上結果提示:所有構建的重組質(zhì)?？稍隗w內(nèi)外得到有效表達。尾靜脈高壓注射復旦大學_[海醫(yī)學院碩士論文IL一17在ConA誘導的自身免疫性肝損傷中的作用及其機制研究中文摘要質(zhì)粒PcDNA3.1一IL一17上調(diào)小鼠體內(nèi)的IL一17，明顯的加重了模型小鼠的肝損傷程度。實驗結果證明，血清ALT較對照組明顯增高，并且伴有肝臟細胞壞死面積擴大。更重要的是，相關炎癥細胞因子TNF一。和IL一6也較對照組明顯
6、升高。這些數(shù)據(jù)提示，IL一17與ConA誘導的自身免疫性肝炎有著密切的關系。第三部分ConA誘導的自身免疫性肝損傷中IL一17的來源我們己經(jīng)證明IL一17在ConA誘導的自身免疫性肝炎中起著重要的作用。鑒于以上原因，研究本模型中IL一17的細胞來源對于自身免疫性肝炎的發(fā)病機制的研究具有重要的意義。我們檢測了ConA誘導的自身免疫性肝炎模型中肝臟局部的單個核細胞分泌IL一17的情況，實驗結果顯示，肝臟局部分泌IL一17的細胞比例較對照組明顯升高，所以我們認為在肝臟損傷中起著作用的IL一17是肝臟局部細胞分泌的。鑒于此，我們首先檢測了ConA誘導的自身免疫性
7、肝損傷中分泌IL一17的T細胞，我們發(fā)現(xiàn)在模型小鼠的肝臟中分泌的IL一17的T細胞比例，與前述測得的其在總細胞中的比例一致，這提示，肝臟局部分泌IL一17的細胞主要是T細胞。因此，我們在T細胞的基礎上，由熒光標記的抗CD4與抗CDS抗體染色檢測了不同的T細胞亞群分泌IL一17的情況。實驗結果提示，IL一17主要是由CD4十CDS-和CD4一CDS一這兩群T細胞分泌的，表示這肝臟局部產(chǎn)生IL一17的細胞來源存在著通常意義上的Thl7細胞，即分泌IL一17的CD4十T細胞。但是，這里還存在著一群異于常規(guī)的分泌IL一17的細胞群，既cD4一cDS一T細胞亞群。
8、同時我們發(fā)現(xiàn)，NKT細胞的數(shù)量和比例在肝臟中ConA處理組較對照組明顯升高。進一
