薄層色譜待打印

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1、菠菜葉綠素的分離?三、實驗儀器及試劑　　儀器：載玻片；展開槽；玻璃棒；研缽　　試劑：硅膠G；95％乙醇；石油醚（60～90）；丙酮；菠菜葉?四、實驗內(nèi)容及步驟　　1．樣品制備　　菠菜葉綠素的提取1～2片新鮮的菠菜葉剪碎放于研缽中研磨，然后加入20mL石油醚-乙醇（1：1）混合液繼續(xù)研磨3分鐘[1]。用移液管或滴定管將萃取液移至分液漏斗中[2]，加等體積水洗滌[3]（旋搖幾下，但不可振蕩以防產(chǎn)生乳化），分層，棄取下層水層，再加等體積水洗滌，棄取水層，將上層溶液移至干燥的小錐形瓶中，用無水硫酸鎂干燥，備用。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　下一步?　　2．

2、制板　　在小燒杯中放入2g硅膠，加入50mL0.5％羧甲基纖維素鈉水溶液，調(diào)成糊狀，均勻倒在3塊干凈的載玻片上[4]（2.5cm×7.5cm）,用玻璃棒刮平，輕輕振搖，使硅膠均勻鋪在載玻片上且表面光滑均勻。于室溫下放置15分鐘，晾干。然后放入烘箱在105～110℃活化0.5小時?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　∠乱徊?　　3．分離與鑒定　　在活化的薄層板一端約1～1.5cm處，用鉛筆輕輕劃一條直線作為起點線（不要劃破吸附劑層）或在薄層板邊緣作一記號。用管口平整的毛細(xì)管吸取菠菜葉綠素提取液點樣，斑點直徑約為2～3mm。溶劑揮發(fā)后，將點樣一端放入已放有高

3、約0.5cm展開劑的展開槽中[5]（展開劑為丙酮：石油醚=1：2），蓋好蓋，觀察展開過程，當(dāng)展開劑沿上行到距薄層板另一端約1cm時，立即取出，并立刻用鉛筆劃出展開劑前沿的位置。晾干后，仔細(xì)量下每個斑點所走的距離，計算Rf值?！　「阶?　　[1]只需適當(dāng)研磨，不可研得太爛而成糊狀，否則會造成分離困難。?　　[2]也可用小布氏漏斗過濾，稍稍減壓并用瓶子擠壓固體。?　　[3]水洗的目的是洗滌乙醇及提取液中的少量水溶物。?　　[4]載玻片必須洗凈，并用少量丙酮或乙醚擦拭。?　　[5]展開槽加入溶劑后，可輕輕搖動幾下，使之充滿溶劑蒸汽。實驗7.薄層層析（甲基橙與熒光黃）?實驗?zāi)康囊?了解薄

4、層層析的原理，操作和應(yīng)用。實驗內(nèi)容：色素的薄層層析：1、硅膠薄層板的制備取潔凈干燥的玻片數(shù)塊，放在水平桌面上備用，稱取硅膠H10克及40ml水，置于乳缽中研勻，用牛角勺涂布在玻片上，用手指抬起玻片一端，連續(xù)在桌面上輕輕拍打，使形成一均勻薄層，平放在水平玻板上，讓水分自然蒸發(fā)，晾干備用。2、配展開劑：用吸量管準(zhǔn)確量取氯仿2.00ml，甲醇0.50ml于潔凈干燥的層析筒中，搖勻、密閉備用。3、點樣：硅膠-H薄層板一塊，用管口平整的毛細(xì)管將甲基橙、熒光黃及兩者混合乙醇液分別點在起始線的三個原點上，斑點擴散直徑不應(yīng)超過2—3mm，放置片刻待乙醇揮干。4、展開：將點好樣品的硅膠層析板放入盛有

5、展開劑的層析筒中，（注意：切勿將點樣處浸沒于展開劑中進行密閉展開。）（如圖）當(dāng)展開劑前沿擴散到距頂端1厘米左右時，取出薄層板，立即用大頭針劃出溶劑前沿，然后置薄層板于通風(fēng)處揮干展開劑。5、計算Rf值：用直尺分別量出原點到斑點中心的距離和原點到展開劑前沿的距離，分別計算出：甲基橙、熒光黃，混合樣品的Rf值，用混合樣品的兩個Rf值與對照品甲基橙、熒光黃比較鑒定混合樣品。實驗十四薄層色譜法（亞甲基藍(lán)—熒光黃的分離）一、目的要求1．學(xué)習(xí)薄層色譜法的原理；2．掌握薄層色譜法的操作。二、基本原理薄層色譜法也叫薄層層析法。它的特點是把吸附劑均勻地鋪在一塊玻璃板上，鋪成薄薄的一層，一般以0.5～1

6、毫米厚為宜。然后在這薄層上點好樣品，將這點了樣品的薄板放在盛有一定展開劑的層析缸中，層析就在這薄層上進行，故稱為薄層層析法。層析法是一種有效的分離方法，它是將待分離的混合樣品置于某種吸附劑（固定相）上然后讓一溶劑（流動相）通過。由于混合樣品中各組分在吸附劑和溶劑中的吸附、溶解能力不同即在兩相中的分配不同，所以各組分在固定相上隨溶劑移動的速度不同，從而達到分離的目的。薄層層析法具有操作簡便，靈敏度高等優(yōu)點，因此廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的鑒定、分離和提純。有色物質(zhì)的樣品，在薄板上展開后可直接觀察到它們的分離情況。但無色物質(zhì)的樣品，在薄層上展開以后，需要通過顯色才能觀察到它們的分離情況。顯色方法可

7、在薄板上噴顯色劑或把薄板放入密閉缸中用顯色劑熏蒸，而顯出有色斑點。對一些熒光物質(zhì)樣品，可在紫外光下照射來觀察分離情況。三、儀器和試劑1．儀器：載玻片10毫升量筒50毫升燒杯250毫升燒杯表面皿研缽2．試劑硅膠G(200～400目)、0.5％CMC水溶液(羧甲基纖維素鈉水溶液)0.1％亞甲基藍(lán)水溶液、0.1%熒光黃乙醇溶液、未知液四實驗步驟：1．薄板的制備稱取3克硅膠G，加0.5％CMC水溶液7毫升，立即調(diào)成糊狀。用拇指和食指拿玻片一端的邊緣，稍傾斜，將調(diào)好的糊狀硅膠G