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《薄層色譜技術(shù)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、1.薄層色譜技術(shù)概述中藥是祖國醫(yī)藥寶庫的重要組成部分，是祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)賴以防病治病的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣直接關(guān)系到人民用藥的安全和有效。在檢驗中藥真?zhèn)畏矫嫱ǔ２捎玫臋z測手段有形態(tài)鑒別、理化鑒別和光譜色譜分析等。而作為色譜技術(shù)一個分支的薄層色譜由于其獨具的長處而被廣泛應(yīng)用于中藥分析。層鑒別作為法定的檢驗項目是各級藥品檢驗部門和藥品生產(chǎn)、經(jīng)營部門的質(zhì)檢人員檢驗中藥的強制性檢驗項目。在可預(yù)見的將來，薄層色譜技術(shù)仍將是中藥鑒別最主要的手段之一。無須贅言，如同其它色譜技術(shù)一樣，一個樣品分析結(jié)果好壞，取決于能否得到一
2、個分離度和重現(xiàn)性良好的色譜。為了更好地執(zhí)行國家藥典中藥薄層鑒別項目，中藥檢驗室基本設(shè)備和配套和檢驗人員操作技術(shù)的規(guī)范化是獲得較高質(zhì)量的薄層色譜最基本的要求。薄層色譜分析與其他色譜分析相比，其顯著不同之一是得到的圖譜是直觀性很強的圖象。一個比較復(fù)雜的中藥薄層色譜，尤其是成分未明而斑點較多的薄層色譜往往是很難用文字描述的；何況藥典正文因體例的限制，也不可能作過多的文字敘述。關(guān)于同一品種的藥材商品的個體差異，如何判斷的問題。在實際的樣品分析中，的確存在著由于商品個體差異，致使薄層色譜難以和對照藥材和色譜完全吻合。其實
3、，在藥材的形態(tài)鑒別中，這是司空見慣的問題，只要鑒別特征可靠，基礎(chǔ)工作比較扎實，一般不會由于個體之間的形態(tài)差異而無法判斷。因為同一品種的不同個體雖然有差異（即使對照藥材也有這個問題），但是既然是同一品種，也必然存在著共性特征。外在的形態(tài)是如此，反映內(nèi)在成分的色譜也是如此。譬如有無牲成分就是共性，如黃連均含小檗堿，小檗堿的有無固名可以作為黃連真?zhèn)舞b別的依據(jù)，但小檗堿未必就是黃連的問題。所以觀察完整的色譜結(jié)合特征成分的辨認，就進一步提高了鑒別的準確度；經(jīng)過比較，取大同棄小異，做出合理的判斷。對于分布地區(qū)廣泛，商品規(guī)格
4、較多的品種，需要反復(fù)比較；有些品種個體之間成分變異較大，需要做大量的基礎(chǔ)研究，掌握規(guī)律，方可設(shè)立對照藥材，不能一蹴而就，所以藥典中并非所有的品種都設(shè)有對照藥材。在中藥制劑中，由于制備工藝的不同或成分之間的相互干擾，圖譜常常不能與原藥材的色譜完全吻合，這就是更需要分析人員有較強的判斷能力-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
5、----------------------器材與操作薄層板可用預(yù)制板或手工自制板，目前最常用的仍然是手工自制板。用于制備薄層板的玻璃要求表面光潔、平整，最好使用厚薄1~2mm的優(yōu)質(zhì)平板玻璃，普通玻璃一般不宜制作薄層板，玻璃板需洗凈至不掛水，晾干，貯存于干燥潔凈處備用。玻璃板反復(fù)使用時，應(yīng)注意經(jīng)常用洗液及堿液清洗，保持玻璃板面的光潔是保證薄層板質(zhì)量的最起碼要求，如選用預(yù)制板應(yīng)注意生產(chǎn)廠家提供的有關(guān)參數(shù)，經(jīng)挑選，試用是否符合要求。涂布器應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。涂層的工具有手工、半自動
6、、全自動薄層涂布器。點樣器材最常用也最方便的是定量點樣毛細管（微升毛細管），規(guī)格有0.5ul、1.0ul、2.0ul、5.0ul、10ul等多種。選用時要求標示容量準確，管端平整光滑，管壁潔凈，液流通暢，無堵塞，無污染。也可使用色譜用的微量移液管或薄層用微升注射器。為了提高點樣效率，還可以選用點樣輔助設(shè)備，如點樣支架，半自動或自動點樣器。先用點樣器材和輔助設(shè)備應(yīng)注意器材本身的質(zhì)量，依賴劣質(zhì)的器材不能保證點樣的質(zhì)量。一般的概念定性鑒別沒有定量的要求，但為了對樣品在定性鑒別時能同時給以“量化”評價，點樣要求最好還是
7、用定量的點樣器材。展開箱（層析缸）應(yīng)當用薄層色譜專用的展開箱，展開箱有水平式及直立式兩種類型；日常用的最多的是直立式展開箱，它又分為平底展開箱和雙槽展開箱。雙-槽展開箱具有節(jié)省溶劑、便于平衡、可控制展開箱內(nèi)的濕度等優(yōu)點，推薦使用此種展開箱。水平式展開箱需要使用預(yù)制板或“加固”的自制板（如加羧甲基纖維素鈉），用水平式展開箱還可以從薄層板的兩側(cè)向中間展開，這樣可使一塊薄層板所承受的樣品個數(shù)比常規(guī)上行展開的薄層板增加一倍，但是由于展距短（約5cm），所以適合于高效預(yù)制板。用不合規(guī)格的玻璃器皿，如生物標本缸等不能保證展
8、開的質(zhì)量。顯色與檢測儀器載有樣品的薄層板展開后，有的需要用某些試劑（如顯色劑）使之顯色。涂布顯色劑的方法有噴霧法及浸漬法。噴霧用的噴霧瓶應(yīng)能在一定壓力下使試劑噴成均勻的細霧狀。浸漬法用的浸漬為特制的扁平玻璃槽，使用時，將展開后的薄層板平穩(wěn)垂直地放入浸漬槽中一至數(shù)秒鐘后取出，揩凈薄層板背面殘余的試劑（需要時加熱）使之顯色。通常使用最多的仍然是噴霧法。觀察薄層色譜用的紫外燈裝有長波段（36
