海洋源嗜酸乳桿菌肽聚糖的免疫效應(yīng)及機(jī)理研究

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1、TS241公開分類號(hào)：____________密級(jí)：______________ＵＤＣ：____________單位代碼：______________11646碩士專業(yè)學(xué)位論文論文題目：海洋源嗜酸乳桿菌肽聚糖的免疫效應(yīng)及機(jī)理研究學(xué)號(hào)：_________________________1111085041姓名：_________________________王琳珺工程碩士專業(yè)學(xué)位類別：________________________食品工程專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域：________________________海洋學(xué)院學(xué)院：_________________________潘道東指導(dǎo)

2、教師：_________________________合作導(dǎo)師：_________________________無論文提交日期：2014年6月13日萬方數(shù)據(jù)AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeImmuneeffectandmolecularmechanismofpeptidoglycanderivedfrommarinesourceLactobacillusacidophilusCandidate：LinjunWangSupervisors：ProfessorDaodongPanFacultyofM

3、arineSciencesNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADateJune13,2014萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得寧波大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。簽名：___________日期：____________關(guān)于論

4、文使用授權(quán)的聲明本人完全了解寧波大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。（保密的論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定）簽名：___________導(dǎo)師簽名：___________日期：____________萬方數(shù)據(jù)寧波大學(xué)碩士學(xué)位論文海洋源嗜酸乳桿菌肽聚糖的免疫效應(yīng)及機(jī)理研究摘要本文通過分子鑒定技術(shù)和傳統(tǒng)鑒定技術(shù)的多相結(jié)合，探索從海洋浮游生物腸道內(nèi)快速分離嗜酸乳桿菌的方法；然后對(duì)其細(xì)胞壁肽聚糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)研究，對(duì)其分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行磷酸化修飾，以提高其水溶性和免疫

5、調(diào)節(jié)活性；最后探討修飾前后肽聚糖結(jié)構(gòu)的變化和對(duì)巨噬細(xì)胞免疫因子的影響。主要研究內(nèi)容如下：1.海洋源嗜酸乳桿菌的篩選及鑒定以不同來源的魚腸內(nèi)容物為原料，采用溴甲酚紫—MRS改良培養(yǎng)基進(jìn)行初篩，得到28株乳酸菌疑似菌株。再利用生理生化和分子生物學(xué)手段，從28株疑似菌株中鑒定出2株嗜酸乳桿菌D1和B3。通過DPPH清除率實(shí)驗(yàn)，從2株目的菌株中選取較高清除率的菌株D1做進(jìn)一步的探究。結(jié)果表明D1是一株具有高抗氧化能力，并對(duì)新霉素、菌必治、丁胺卡那霉素、慶大霉素等常見藥物有一定耐藥性的優(yōu)良嗜酸乳桿菌。2.海洋源嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備及其酶法水解以上述D1作為嗜酸乳桿菌研究菌種，利用傳

6、統(tǒng)的TCA法分離提取此菌的細(xì)胞壁肽聚糖。為了增加肽聚糖的溶解性以便其更好的發(fā)揮效益，將提取出的肽聚糖溶于變?nèi)芫?溶菌酶混合液中，以不溶物含量為指標(biāo)，通過響應(yīng)面法篩選出酶解的最佳工藝，并將原肽聚糖作為對(duì)照組，分析最佳工藝的抗氧化能力。結(jié)果分析得出嗜酸乳桿菌肽聚糖的最優(yōu)酶解工藝為：變?nèi)芫?溶菌素(μg:mg)的添加比例為20/1，酶解pH為6.00，酶解溫度為41℃，酶解時(shí)間為16h。并且在提高超氧化物歧化酶的活力與抗超氧陰離子的能力上，酶解優(yōu)化組制備的肽聚糖比原肽聚糖的效果更顯著。3.海洋源嗜酸乳桿菌肽聚糖的磷酸化修飾及其結(jié)構(gòu)分析在80℃的條件，采用混合磷酸鹽（5％三聚磷

7、酸鈉，2％三偏磷酸鈉，pH=6.0）對(duì)最優(yōu)酶解工藝條件下制備出的小分子肽聚糖進(jìn)行修飾，得到磷酸化肽聚糖。結(jié)合高效液相、核磁共振、紅外光譜、電鏡以及質(zhì)譜對(duì)磷酸化肽聚糖的結(jié)構(gòu)做進(jìn)一步分析。結(jié)果表明肽聚糖磷酸化后其表面親水性及粘附性均有一定增強(qiáng)，磷酸根連接于C環(huán)的OH根上，與文獻(xiàn)報(bào)道的磷酸根共價(jià)修飾一致。4.海洋源磷酸化嗜酸乳桿菌肽聚糖的免疫效應(yīng)研究I萬方數(shù)據(jù)寧波大學(xué)碩士學(xué)位論文以Raw264.7巨噬細(xì)胞為模型，依次將LPS（0.1?g/ml）、肽聚糖（50?g/ml）、不同濃度的磷酸化肽聚糖（25?g/ml、50?g/