四種水產(chǎn)藥物對牙鲆paralichthys olivaceus肝細胞色素p450酶影響的研究

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1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文四種水產(chǎn)藥物對牙鲆(Paralichthysotivaceus)肝細胞色素P450酶影響．的研究摘要細胞色素P450酶(CYP450)是與動物體內(nèi)藥物代謝關(guān)系最為密切的藥物代謝酶，其活性的誘導(dǎo)和抑制往往會導(dǎo)致藥物的相互作用，從而可能產(chǎn)生水產(chǎn)藥物殘留或影響藥物療效，嚴(yán)重威脅水產(chǎn)品安全。然而，‘關(guān)于水產(chǎn)藥物對魚類CYP450活性誘導(dǎo)和抑制的報道卻非常少。本文以此為切入點，以重要的近海養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類牙鲆為研究對象，在不同水平上研究了水產(chǎn)用藥物對該酶的活性及表達的影響。研究分為兩部分：

2、第一部分：研究了三種水產(chǎn)用喹諾酮類藥物(FQ)氟甲喹、恩諾沙星和諾氟沙星對牙鲆肝組織中氨基比林N．脫甲基酶(APND)、紅霉素N。脫甲基酶(ERND)和7．乙氧基異吩嗯唑酮．脫乙基酶(EROD)活性的影響；以及利用半定量PCR方法研究了上述三種藥物對CYPlA基因表達的影響。結(jié)果表明，和對照組相比，三種喹諾酮類藥物對牙鲆肝S9中APND、ERND、EROD酶活性均具有抑制作用，其中恩諾沙星和諾氟沙星組3種酶的活性極顯著下降(尸<0．01)，而氟甲喹組中，APND、ERND酶活性顯著下降儼<0．05)

3、，EROD酶活性極顯著下降(尸<0．01)。提示這3種FQ藥物牙鲆CYP450酶具有廣泛的不同程度的抑制作用。RT-PCR結(jié)果表明，各藥物組的CYPIA在mRNA水平上發(fā)生了下調(diào)，且3種藥物影響表達下調(diào)的大小為，恩諾沙星>諾氟沙星>氟甲喹，結(jié)合藥物對CYPlA依賴的EROD酶活性抑制的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)3種不同喹諾酮類藥物對CYPlA酶活性及CYPlA基因表達的影響具有基本一致的效果，表明這3種藥物作為抑制劑對CYPlA的抑制機制可能是抑制酶蛋白的合成，即可能是通過抑制CYPlA的表達，從而減少蛋白質(zhì)翻譯，

4、抑制了CYPlA酶蛋白合成，導(dǎo)致CYPlA酶活性下降。第二部分：以中藥黃芩苷作為受試藥物，研究其在不同劑量和作用時間下對牙鲆肝CYP450酶活性及CYPlA基因表達的影響。采用體內(nèi)實驗，將黃芩苷分別按tk￡(50mg／kg·d)、中(100mg／kg·d)和高(200mg／kg·d)--"個劑量連續(xù)口灌牙鲆，并于給藥3、6、9天后取樣。酶活性結(jié)果表明：給藥3天，較空白組而言，黃芩苷各劑量組的如ND、ERND、EROD酶活性沒有明顯變化；給藥6天，高中劑量組的APND、EROD酶活性極顯著增(尸<0．

5、01)，ERND酶活性顯著下降儼<0．05)，1上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文中劑量組的APND酶活性極顯著增N(P

6、lA和CYP2B各自依賴的標(biāo)志酶EROD酶和APND的酶的活性，抑制CYP3A依賴的標(biāo)志酶ERND的活性；黃芩苷對CYPlA的誘導(dǎo)作用與給藥劑量和藥物作用時間呈相關(guān)性，給藥劑量越高，誘導(dǎo)作用越強，給藥時間越長，誘導(dǎo)作用也越強。半定量PCR鮚果表明，各藥物組的CYPlA在mRNA水平上都發(fā)生了上調(diào)，且這種表達的上調(diào)同CYPlA酶的活性一樣隨用藥時間和劑量的增加而加強，說明黃芩苷作為誘導(dǎo)劑對CYPlA的誘導(dǎo)機制可能發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，可通過誘導(dǎo)CYPlA的表達而增強CYPlA酶的活性。關(guān)鍵詞水產(chǎn)藥物，牙鲆

7、，細胞色素P450，酶活，基因表達II上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文EffectsoffouraquaculturaldrugsonhepaticcytochromeP450inParalichthysolivaceusABSTRACTCytochromeP450enzymeshavetheclosestrelationshipwiththedrug—metabolizingenzymesinanimals．Drug-drug．interactionsinfishwhicharegenerallyasso

8、ciatedwiththeinductionandinhibitionofCYP450activitymayleadtotheformationofaquacutturaldrugsresiduesorinfluencethedrugeffect，andthusthreatenthesafetyoffisheryproducts．However，onlyrelativelyfewpapersabouttheinductionandinhibitionofaquacul