hsa-mir-365a對(duì)乳腺癌細(xì)胞mcf-7抑制作用及其機(jī)制

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1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明ⅢIJllllIJIIJJIflllIMIllllJJJlllllflllllllfJY2402401本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：千Ⅵ水簽字日期：擴(kuò)1>年6月∑日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有

2、關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤(pán)版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》中全文發(fā)表，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))、．．學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：氐琳導(dǎo)師簽名(手寫(xiě))：彳l拗‘弋oJ簽字日期：]

3、!d；年6月y日簽字日期：護(hù)I弓年6月∑。日摘要立項(xiàng)依據(jù)：MicroRNA(miRNA)通過(guò)與靶基因mRNA的3’非翻譯區(qū)(3’t3TR)特異性結(jié)合誘導(dǎo)靶基因mRNA的降解或阻遏其翻譯。c．Myc作為一種重要的癌癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、惡性轉(zhuǎn)化和凋亡等過(guò)程中起重要作用。近期的研究表明，c．Myc也可通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA的表達(dá)而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。我們利用生物信息學(xué)方法從已知的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中，預(yù)測(cè)到大量miRNA受c．Myc調(diào)控，其中受c．Myc直接調(diào)控的110個(gè)miRNA位于基因的內(nèi)含子和107個(gè)miRNA位于基因之間。根據(jù)

4、我們?cè)O(shè)定的篩選條件如miRNA表達(dá)水平較高(reads數(shù)大于4)、具有c．Myc的結(jié)合位點(diǎn)(motif>0)、TSS即E．box與miRNA結(jié)合位點(diǎn)距離較近(5kb以?xún)?nèi))以及FDR值即轉(zhuǎn)錄因子對(duì)基因的調(diào)控強(qiáng)度較大(小于O．05)等，共選出5個(gè)位于基因內(nèi)的miRNA和16個(gè)位于基因間的miRNA。最后經(jīng)過(guò)Q．PCR驗(yàn)證以及miRNA的可能作用靶點(diǎn)分析，確定has．miR．365a作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，并系統(tǒng)探討其對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF．7生長(zhǎng)的作用及其分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1．c．Myc特異性siRNA可明顯抑制乳腺癌細(xì)胞MCF．7的c．Myc表達(dá)，

5、其抑制mRNA表達(dá)的強(qiáng)度達(dá)80％以上，對(duì)蛋白也有明顯的抑制作用。血清依賴(lài)性細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)和飽和密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明，c．Myc特異性siRNA介導(dǎo)的c．Myc表達(dá)抑制可使MCF．7的增殖明顯減緩。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，抑制MCF．7的c．Myc表達(dá)可顯著升高細(xì)胞內(nèi)has．miR．365a水平。2．我們?cè)谘逡蕾?lài)性細(xì)胞生長(zhǎng)和飽和密度實(shí)驗(yàn)，以及活細(xì)胞檢測(cè)等觀測(cè)到，Has．miR．365a模擬物(mimic)可明顯抑制MCF．7的惡性增殖，而其抑制劑(inhibitor)則可幾乎完全取消has．miR．365a的作用。3．Has．miR．365

6、a模擬物(mimic)和抑制物(inhibitor)可分別顯著抑制和取消has．mir-365a的靶基因HSPA8(編碼蛋白是Hsc70)的表達(dá)，luciferase報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)也證明，has．mir一365a(模擬物)可特異性地作用于HSPA8的YUTR區(qū)域，進(jìn)而抑制靶基因的翻譯。摘要討論與結(jié)論：c．Myc通過(guò)miRNA調(diào)節(jié)途徑而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程已引起人們的高度關(guān)注。HSPA8是熱休克蛋白70(HSP70)家族一員，編碼73kDa的熱休克同源蛋白Hsc70，后者在促進(jìn)蛋白折疊及維持其正常的結(jié)構(gòu)和功能中都扮演著重要的角色。以往的

7、工作表明，Hsc70無(wú)論是正常狀態(tài)或是應(yīng)激狀態(tài)下對(duì)維持蛋白的動(dòng)態(tài)平衡——如轉(zhuǎn)運(yùn)、組裝、降解等過(guò)程中起關(guān)鍵作用。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，c．Myc調(diào)控的has．mir．365a對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF．7的生長(zhǎng)具有重要的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)我們的結(jié)果還證明，has．mir．365a對(duì)MCF．7細(xì)胞的抑制作用是通過(guò)調(diào)節(jié)其靶基因HSPA8(Hsc70)而實(shí)現(xiàn)的。因此，我們得出結(jié)論：c．Myc調(diào)控的has．mir．365a-Hsc70途徑在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。關(guān)鍵詞：c—Myc、miR．365a．3p、MCF．7、Hsc70AbstractBa

8、ckgroundABSTRACTmicroRNA(miRNA)wasfoundtoinducethemRNAdegredationandtranslationalrepressionbyspecificbindingto