內(nèi)源性血管抑制因子抑制眼底新生血管機理的研究

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1、f10liltIrlllIfrrflIIrfrill1rulY2250623卜-海交通大學醫(yī)學院博士學位論文內(nèi)源性血管生長因子抑制眼底新生血管的機理研究STUDYoFENDOGENOUSPROTEINTOSUPPRESSoCULARNEOVASCULARIZATION作者姓名:張岐學號:0097249268導師姓名:孫曉東專業(yè):眼科學研究方向:眼底新生血管申請學位級別:博士培養(yǎng)單位:上海交通大學醫(yī)學院附屬上海市第一人民醫(yī)院資助基金項目:國家自然科學基金30973259國家973計戈lJ201CB707

2、500關(guān)鍵詞:答辯日期:國家自然科學基金30973259國家973計劃201lCB707500內(nèi)源性血管抑制因子,眼底新生血管,血管內(nèi)皮成長因子,年齡相關(guān)性老年黃斑變性O(shè)neclickstaing,新生血管染色,巨噬細胞2012年10月卜海交通大學醫(yī)學院博士學位論義上海交通大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定,同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進

3、行檢索,可以采用影印、索引或掃描等復制手法保存和匯編本學位論文。保密口,在年解密后適用本授權(quán)書。本學位論文屬于不保密口√。(請在以上方框內(nèi)打“√”)學位論文作者簽名:豸艮磁指導教師簽名:日期:2012年10月1日卜海交通大學醫(yī)學院博士學位論義上海交通大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學位論文,是本人在導師的指導下,獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不包括任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體,均已在文中以明確方式標明。本

4、人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名:蘇磋.日期:2012年10月1日.上海交通大學醫(yī)學院博士學位論文內(nèi)源性血管抑制因子抑制眼底新生血管的機理研究摘要新生血管性疾病(Neovascularization,NV)是當今很多眼科疾病導致視力災難性喪失甚至致盲的主要原因。在正常視網(wǎng)膜血管的發(fā)育過程中,血管內(nèi)皮細胞(Vascularendothelialcell,VEC)在各種細胞因.了作用下增殖并通過細胞外基質(zhì)(Extracellularmatrix,ECM)進行遷移有序的形成血管。而在

5、病理性NV形成過程中,在眼的相關(guān)部位如虹膜、視網(wǎng)膜、及脈絡(luò)膜可形成無序的,異常形態(tài)結(jié)構(gòu)及無功能的血管形成。這些新生的血管很容易發(fā)生滲漏、出血、進而引起視網(wǎng)膜水腫、纖維增生、視網(wǎng)膜玻璃體出血或牽引性視網(wǎng)膜脫離可以導致潛在的災難性的視力喪失。本研究中,我們嘗試探討運用內(nèi)源性血管抑制因子來治療和抑制眼底NV并簡要的討論眼底NV的發(fā)生機制。我們著重研究了內(nèi)源性血管生長抑制因子對于眼底NV的作用機制。內(nèi)源性血管抑制因子,是一組機體自身存在的抑制血管生成的負反饋分子,對機體正常生理作用的于預和影響小。在研究中我們

6、發(fā)明了一利-新的免疫染色方法可以高質(zhì)量定性和定量的評價視網(wǎng)膜新生血管(Retinalneovascularization,RNV)以及脈絡(luò)膜新生血管(Choroidalneovascularization,CNV)。本研究提供了幾種眼底NV可行的新型治療靶點,不僅可以作為有價值的研究工具,并且可能具備潛在的治療前景。卜海交通大學醫(yī)學院博士學位論文第一部分:1OneClickStaining一種特殊的新生血管特異性免疫組織化學染色以用于研究新生血管和巨噬細胞關(guān)系研究目的:本研究的目的是研究和探索新的染色

7、方法以提高及規(guī)范化視網(wǎng)膜血管和新生血管(NV)的染色,對新生血管更準確的進行定性定量分析。方法:對缺氧誘導新生血管的小鼠,在出生后17天,對其視網(wǎng)膜表面產(chǎn)生的新生血管進行免疫組織化學染色,分別運用了熒光標記的GSAlectin抗體和沒有熒光標記的抗體和不同長度的染色時間。與此同時,在缺氧誘導新生血管模型小鼠出生后的第13,15,17,19,2l,23,25天進行傘視網(wǎng)膜新生血管和巨噬細胞的體外染色,鋪片拍照以觀察新生血管和巨噬細胞的關(guān)系。同時對出生后21天rhoNEGF轉(zhuǎn)基因小鼠采用同樣體外染色方法,

8、可以特異性地染色視網(wǎng)膜下血管。結(jié)果:對缺氧誘導的小鼠新生血管模型(ROP模型)視網(wǎng)膜新生血管在用GSA標記的Lectin抗體染色40分釧t后,可以觀察到清晰的新生血管的細微結(jié)構(gòu)包括新生血管前端的絲狀足突,并且視網(wǎng)膜原有的結(jié)構(gòu)血管沒有或者僅有少量背景顏色,非常利于使用圖像分析軟件來定性和定量的評價新生血管。當以GSA標記的Lectin抗體和抗F4/80的抗體或者抗iNOS的抗體進行視網(wǎng)膜雙重染色,結(jié)果發(fā)現(xiàn)iNOS在生長和退行過程中新生血管高表達,而在視網(wǎng)膜

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