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《栽培花生基因組bac文庫的構建》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、摘要栽培花生(ArachishypogaeaL．)是異源四倍體，含有A和B兩個基因組?，F(xiàn)有研究認為四倍體栽培種是由二倍體種A．duranensis(Agenome)和A．ipaansis(Bgenome)單一雜交后經(jīng)染色體自發(fā)加倍而成。單一雜交起源、多倍化引起的生殖隔離和少數(shù)育種親本的使用，使栽培花生基因組高度保守，遺傳多樣性非常有限，因此，利用遺傳作圖的方法分析基因十分困難?；ㄉ蚪MBAC文庫的構建，對利用物理圖譜的方法來分析花生基因組有很大的價值，可從該文庫中調取大量有用的基因，在利用基因工程技術改良作物品種性狀、開展分子育種等方面發(fā)揮重要作用。本實驗以栽培花生中花8號
2、植株葉片為材料，參照己報道的BAC文庫構建方法，在此基礎上進行技術改進，建立了一套適用于栽培花生品種的BAC文庫構建技術體系。選取幼嫩的植物葉片，得到了濃度適宜，分子量大于1Mb的高分子量DNA瓊脂糖包埋塊兒，選擇合適的酶切條件回收到符合分子量要求的DNA大片段，通過建立高效的連接體系，到目前為止共得到25，344個重組克隆。隨CLOg取80個克隆經(jīng)小量堿裂解法提取質粒酶切鑒定，脈沖凝膠電泳結果顯示，插入片段大小在30kb．150kb之間，平均插入片段大小為80kb，空載率為1．25％。隨機挑取3個BAC克隆做穩(wěn)定性繼代實驗，連續(xù)培養(yǎng)100代之后，BAC克隆依然穩(wěn)定，沒有重排
3、現(xiàn)象。本實驗構建的BAC文庫是我國迄今構建的第一個栽培花生BAC文庫，盡管文庫覆蓋率到目前為止還不能滿足作圖和測序的需要，但是建立了一個完整高效的適用于栽培花生基因組的BAC文庫構建技術體系。關鍵詞：栽培花生；BAC文庫；文庫構建lfff『I『
4、fI川刪644AbStractAbstractCultivatedpeanut0rach捃hypogaeaL．)isallallotetraploidofrecentorigin，withallAABBgenome．Itwasreportedthatallotetraploidisarosefromhybridizationoftwo
5、wildspecies，A．duranensis(Agenome)andA．枷謄瑚西(Bgenome)，andspontaneouschromosomeduplication．Reproductiveisolationresultedt％mpolyploidizationandlimitofbreedingparentshaveledtolimitedavailabilityofalleliccombinations，lackofvariabilityinsomeimportanttraits．Therefore，theanalysisofthegenomeofpeanuti
6、sdifficulttoberealizedbygeneticlinkagemapping．Bacterialartificialchromosome(BAC)librariesalefundamentaltoolsforgenomiestudies，beingimportantforphysicalmapping，map—basedgenecloningandanalysisofgenestructureandfunction，playinganimportantroleinagriculturaldevelopment．Weconstructedabacterialart
7、ificialchromosome(BAC)libraryintheresearchbasedonthegenomeofcultivatedpeanutzhonghua8．Accordingtothetraditionalmethod，ahigh-efficienttechnologysystemofBAClibraryconstructionforpeanutwasestablished．WegottheproperconcentrationandsizeofnuclearDNAfragmentsfromyoungleaves．Throughaseriesofpartial
8、restrictiondigests，wedeterminedtheconditionsthatyieldamaximumpercentageoffragmentsbetween100kb一300kb，andwereclaimedthepartialdigestedDNAtobelinkedtothevector．Sofarwehaveobtained25，344recombinantclones．80cloneswereselectedrandomlyfortesting．TheresultofPFG
