p13kakt通路在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的作用

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1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文P13K/Akt通路在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的作用姓名：邢玲玲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：段惠軍201204中文摘要P13K／Akt通路在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的作用摘要目的：糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病主要的微血管并發(fā)癥之一，在西方國家已成為導(dǎo)致終末期腎衰的首要原因，在我國其發(fā)病率和在慢性透析性腎病中所占的比例也在不斷增加。探討其發(fā)病機制、尋求有效的防治措施對廣大DN患者具有重要意義。DN的發(fā)病機制十分復(fù)雜，涉及到糖脂代謝紊亂、血流動力學(xué)異常、炎癥介質(zhì)釋放、細(xì)胞因子、氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋

2、亡等多因素的作用。近年來，隨著足細(xì)胞系的建立及生化技術(shù)的發(fā)展，對足細(xì)胞的認(rèn)識和研究逐漸深入，足細(xì)胞損傷在DN發(fā)病中的作用得到認(rèn)同，被認(rèn)為是引起DN蛋白尿和腎小球硬化的關(guān)鍵因素，這為DN的預(yù)防和治療帶來了新的契機。足細(xì)胞又稱為臟層腎小球上皮細(xì)胞，與內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球基底膜(glomerularbasementmembrane，GBM)共同構(gòu)成腎小球濾過屏障。早期損傷形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為足突融合和消失，并逐漸出現(xiàn)足細(xì)胞體積變小、陰電荷減少，直至足細(xì)胞從GBM上脫落隨尿液排出。足細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，增生能力差，當(dāng)從GBM上脫落的速度超過了其代償能力時，破壞了濾過膜的完整性，從而形成大量

3、蛋白尿。同時足細(xì)胞不斷受到刺激，分泌細(xì)胞外基質(zhì)如Ⅳ型膠原(collogenIV，Col1V)增多，最終引起腎小球硬化。高糖、血管緊張素II、脂質(zhì)代謝紊亂、氧化應(yīng)激、炎癥因子等均可刺激足細(xì)胞，引起足細(xì)胞功能失調(diào)，導(dǎo)致足細(xì)胞損傷。新近研究表明足細(xì)胞的功能異常與本身表達(dá)的特異性結(jié)構(gòu)蛋白發(fā)生突變或缺失有關(guān)。有關(guān)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白研究較多的是裂孔膜蛋白，它們組成裂孔膜復(fù)合體共同維持著裂孔膜的完整性。近年來足盂蛋白(podocalyxin，PCX)在多種腎臟疾病足細(xì)胞損傷中的作用受到重視，它是足突項膜區(qū)的成熟標(biāo)志，是足細(xì)胞上主要帶電荷的結(jié)構(gòu)蛋白，也是組成。腎小球濾過膜電荷屏障的主要物質(zhì)之

4、一，當(dāng)腎組織表達(dá)減少或尿中表達(dá)增多可提示早期足細(xì)胞損傷。．結(jié)蛋白(desmin)是～種細(xì)胞骨架中間絲蛋白，與0【．平滑肌肌動蛋白(0【．smoothmuscleactin，僅．SMA)一樣屬于肌源性細(xì)胞標(biāo)志，正常情況下僅在系膜細(xì)胞少量表達(dá)，足細(xì)胞不表達(dá)，當(dāng)足細(xì)胞受損發(fā)生表型改變時，可大量表達(dá)，中文摘要因此也可作為反映足細(xì)胞損傷的標(biāo)志。磷酸酰肌醇3激酶／蛋白激酶B(phosphoinositide3kinese／proteinkinaseB，P13K／Akt)信號通路參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡以及遷徙等，其過度激活導(dǎo)致細(xì)胞功能失調(diào)。LY294002通過靶向抑,OPl3K的催化

5、亞基p110，阻礙P13K的活化，從而抑制其下游靶分子PDK和Al(t的活化，．成為研究P13K-Akt通路最經(jīng)典的抑制劑。第10號染色體同源丟失性磷酸酶．張力蛋白基因(phosphaseandtensinhomologydeletedonchromosometen．PTEN)，具有特異磷酸酯酶的活性，是P13K／Akt通路的負(fù)調(diào)控基因，通過使在3’羧基位脫磷酸生成PIP2，拮抗P13K的作用，實現(xiàn)對P13K／Akt通路的負(fù)調(diào)控。研究表明，P13K／Akt通路參與了DN小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化、系膜細(xì)胞增生肥大等，我科最新的研究也證實了該通路參與了高糖刺激的腎小管上皮細(xì)胞脂質(zhì)代

6、謝和細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，然而該通路在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷方面的研究卻鮮見報道，尤其未見DN患者方面的相關(guān)報道。本研究擬通過觀察DN患者及體外高糖刺激的小鼠足細(xì)胞中P13K／Akt通路的激活和足細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)變化，并進(jìn)一步應(yīng)用LY294002干預(yù)或PTEN基因轉(zhuǎn)染足細(xì)胞，探討P13K／Al(t通路對足細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)改變的影響，以證明P13K／Akt通路在DN足細(xì)胞損傷中是否發(fā)揮作用，為糖尿病腎病的防治提供新的干預(yù)靶點。方法：1糖尿病。腎病患者病例選擇及PCX、ColIV、desmin、p-Akt、PTEN的檢測選擇2009年10月至2011年10月期間在河北醫(yī)科大學(xué)第二

7、醫(yī)院腎內(nèi)科住院，經(jīng)病史、臨床檢查及腎活檢病理診斷為糖尿病腎病的患者30例，年齡51．5+15．7歲，男16例，女14例(男：女=8：7)，除外乙肝病毒相關(guān)性腎炎、狼瘡性腎炎、紫癜性腎炎、淀粉樣變性、骨髓瘤腎病等繼發(fā)性腎臟病患者，除外合并膜性腎病、局灶階段性腎小球硬化、IgA腎病等原發(fā)性腎臟病的患者。根據(jù)根據(jù)2010年美國腎臟病理學(xué)會糖尿病腎病分級標(biāo)準(zhǔn)將所有患者分為3組：I級病變組9例，II級病變組10例，III級病變組11例。詳細(xì)記錄每位患者腎活檢前的臨床資料。腎活檢日清晨留取新鮮尿標(biāo)本，離心取上清液，ELISA方法檢測尿PC