大菱鲆類胰島素樣生長因子和結(jié)合蛋白基因克隆及表達的研究

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1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文大菱鲆類胰島素樣生長因子和結(jié)合蛋白基因克隆及表達的研究姓名：胡健申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：溫海深201206大菱鲆類胰島索樣生長因子和結(jié)合蛋白基因克隆及表達的研究大菱鲆類胰島素生長因子和結(jié)合蛋白基因克隆及表達的研究摘要大菱鲆@印^脯口砌淞m似擁淞)為我國北方沿海主要養(yǎng)殖品種，具有重要的經(jīng)濟價值。本文以人工養(yǎng)殖大菱鲆為研究對象，采用分子生物學(xué)相關(guān)技術(shù)方法，對IGF信號系統(tǒng)相關(guān)基因IGF．2，IGFBP．1，IGFBP．2在大菱鲆胚胎及仔稚魚時期的功能進行了分析，結(jié)果如下：1．大菱鲆類胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白一1(IGFBP一1)基因克隆與表達本實驗克隆得到

2、大菱鲆類胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白一l(IGFBP．1)基因cDNA全長為1179bp，其中35bp一775bp為編碼區(qū)，共編碼247個氨基酸，氨基酸序列包括3個區(qū)域，分別為保守的N端和C端以及高度分散的L區(qū)域，并且在N端和C端存在18個半胱氨酸殘基。組織表達分析表明，IGFBP．1基因在肝臟、脾、心臟、胃、腎臟、腸中均有表達，其中以肝臟和脾中的表達量最為豐富。通過RP．PcR方法檢測IGFBP一1基因在大菱鲆胚胎及仔稚魚時期的表達情況，從未受精卵開始表達，在原腸期達到最低，在之后的發(fā)育期里顯著升高，并在稚魚期達到最高值。結(jié)果表明，IGFBP．1基因在大菱鲆的早期發(fā)育過程中起著重要的生理作用。2

3、．大菱鲆類胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白一2(IGFBP一2)基因的克隆和表～．L還采用RACE克隆方法得到大菱鲆類胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白一2(IGFBP-2)基因cDNA全長1057bp，其中43bp一852bp為編碼區(qū)，共編碼270個氨基酸，同IGFBP．1基因類似，氨基酸序列包含3個區(qū)域，分別為保守的N端和C端以及高度分散的L區(qū)域，在N端和C端存在18個半胱氨酸殘基。組織表達分析表明，IGFBP．2基因在大菱鲆成魚各組織中分布廣泛，在腦、心、肝、腎、腸中表達量較豐富，皮、脾次之，鰓和卵巢較少，胃中有微弱表達，肌肉中檢測不到表達。大菱鲆類胰島素樣生長因子和結(jié)合蛋白基因克隆及表達的研究使用RT-

4、PCR的方法檢測IGFBP．2基因在大菱鲆胚胎及仔稚魚發(fā)育期的表達，可以發(fā)現(xiàn)，在未受精卵和原腸期中沒有表達，從胚體期開始檢測到表達，并在后面的幾個時期逐漸上升，13日齡仔魚達到最高，稚魚略有下降，但差異不顯著，表現(xiàn)出與IGFBP．1基因不同的生理作用。3．大菱鲆類胰島素樣生長因子一2(IGF一2)基因的克隆及兩種類胰島素樣生長因子(IGF一1，lGF一2)基因的表達采用同樣的方法克隆得到大菱鲆類胰島素樣生長因子一2(IGF．2)基因cDNA全長共880bp，其中166bp一823bp為編碼區(qū)，共編碼219個氨基酸。整個氨基酸序列包括信號肽區(qū)，高度保守的B，C，A，D區(qū)域，以及E區(qū)域，其中在B區(qū)

5、域和A區(qū)域中包含6個半胱氨酸殘基。采用RP．PCR方法檢測IGF．1和IGF．2基因組織表達，發(fā)現(xiàn)這兩種基因均有較廣泛的表達模式，其中IGF．1基因除了在腸中沒有檢測到表達，其他組織均檢測到表達，肝臟中的表達量最豐富；IGF．2基因在所有組織中均檢測到表達，肌肉中的表達量較低。在胚胎仔稚魚發(fā)育期內(nèi)‘，IGF．1基因除了在未受精卵內(nèi)表現(xiàn)出一個較高的水平，從原腸期開始，表達水平逐漸上升；IGF．2基因在原腸期表現(xiàn)出一個較高的表達量，其他各期均有表達，差異不顯著。關(guān)鍵詞：大菱鲆(兜印，7拍a，刪s腑x，刪s)類胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白一1，一2(IGFBP一1，一2)類胰島素樣生長因子一1，一2(I

6、GF一1，一2)大菱鲆類胰島素樣生長因子和結(jié)合蛋白基因克隆及表達的研究StudiesoncloningandexpressionanalysisofIGFandIGFBPgenesinturbot做叩^歷口加珊，咒皿砌“s)AbStractAsoneof也emainseawaterbreedingsintllenorthcoaStalareaofChina，tIlrbot(＆op^搋口Zm懈m鍛fm獬)hausimp刪economicVa：Iue．Thispapermainly咖dy0ncultu溉ltIlrbot，缸}m砒dch也erelatjVegeneofIG限Si薩a1syst鋤IGF

7、．2，IGFBP．1，IGFBP-2aresmdiedaIldtak鈕bythem如odsofm01ecularbiologyindetails．Them咖resultSandconclusionsareasf01lows：1．CloningandexpressionanalysisofInsulin—likegrowthfactorbinmngprotein-1(IGFBP一1)intIlrbo