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《非病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因雞的初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文非病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因雞的初步研究姓名：王鶴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王彥彬；康相濤201206河南農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩二L研究生論文中文摘要非病毒載體相比病毒載體具有一些優(yōu)勢(shì)：耐受性、相關(guān)的自身缺陷或誘導(dǎo)中和抗體反應(yīng)性及載體構(gòu)建和鑒定的簡(jiǎn)便性。實(shí)驗(yàn)利用流體力學(xué)注射法、肌肉注射法和睪丸注射法三種方法以非病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因雞研究，在基因治療、基岡疫苗及轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)上有一定的指導(dǎo)意義。1．流體力學(xué)注射法：10％體重pCAG—EGFP質(zhì)粒(40～100t-tg)快速靜脈注射6～10日齡小公雞(10～】5s
2、內(nèi)完成)。利用熒光顯微鏡觀(guān)察、PCR及免疫綱化法鑒定811、1d、3d、5d心、肝、脾、肺、腎組織內(nèi)EGFP基閃的表達(dá)，結(jié)果顯示8h肝、脾、肺、腎均檢測(cè)到EGFP，但很快消火。并且8
3、1心、肝、脾、肺、腎綢織基岡組DNAPCR檢測(cè)為陰性，說(shuō)明EGFP術(shù)整合劍雞基岡綢上。此方法對(duì)雞肝臟基岡功能獲得或缺火快速研究提供了一個(gè)有力的『：具。2．肌肉注射法：6～10日齡小公雞左腿肌肉注射pCAG—EGFP質(zhì)粒40～100}-LpdX。利用熒光顯微鏡觀(guān)察、PCR利免疫組化法鑒定811、1d、3d心、肝、脾、肺、腎綢織內(nèi)EGFP基岡的表達(dá)，結(jié)果顯示8h
4、月千、腎組織內(nèi)檢測(cè)到EGFP的表達(dá)，隨即消火。且其PCR結(jié)果為陰性，說(shuō)明EGFP木整合劍雞基因組上。此方法對(duì)快速簡(jiǎn)便的基岡治療提供了一種可能。3．睪丸注射法：18周齡體重相近、健康公雞睪丸內(nèi)注射801』gpCAG．EGFP與脂質(zhì)體混合物。轉(zhuǎn)染48h后，利_}_}j免疫組化法檢測(cè)翠丸2R縱內(nèi)EGFP基岡的表達(dá)，結(jié)果為
5、j11J眭，說(shuō)明EGFP基岡在睪丸組織內(nèi)成功地表達(dá)；但是30、60、70d精液PCR均術(shù)檢測(cè)到EGFP。導(dǎo)致該結(jié)果可能由丁-精子生成時(shí)質(zhì)粒丟失或被內(nèi)源性DNases的降解。盡管睪丸注射法重復(fù)性著，但其仍有一定的優(yōu)勢(shì)。關(guān)鍵詞：1
6、r病毒載體；流體力學(xué)注射法；肌肉注射法；睪丸注射法；雞2河南農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩士研究生論文AbstractNon—viralvectorscomparedtotheviralvectorshavesomeadvantages：tolerability、relatedtotheir0wnshortcomingsorinductionofneutralizingantibodyreactivityandthesimplicityofvectol‘constructi013andidentification。Itutilizedthet11l
7、^eemethodsofhydrodynamicsinjection．intramuscularinjectionandtesticularinjectionf、Ortheresearchoftransgenicchickenwith11011一viralvect01，S．whichhascertainguidingsignificaneeforgcnetheraPY，geneticvaccinesandtl‘a(chǎn)llsgenicchickel3pl’oduction．1．hydrodynamicsinjectionmethod：Itis1
8、0％weightpCAG—EGFPplasmid(40～10099)thatrapidlyiljectedintotheveinof6～10day．oldcockel·elf1O～15s)．ItidentifiedtheEGFPexpressionofheart，liver，spleen．1ungandkidneytissueswhichweresampledat8h，1d，3dand5dbyfluorcscel3Ce111iCl’oscopyobservation，PCR，andilllnlunohistochemistrymethod
9、．TheresuItsshowedthatitdetectedtheexpl·essionofEGFPinliver，spleen，1ungandkidneyat81a，butsoondisappcal’ed．AndthegenomicDNAPeRtestofheart，liver，spleen，lungandkidneytissuesat811wasnegat。tve，whichshowedthatEGFPisnotinte91’atedintothechickellgenonle。Thismethodpl‘ovidesapowelfu
10、ltoolfollt11Cquicldystudyongain—andloss—of-fimctionofthechickenliver．2．itmlanluscu]al‘il!jection
