精子載體法介導(dǎo)生產(chǎn)牛轉(zhuǎn)基因胚胎的初步研究

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1、分類號怨f三UDC碩士學(xué)位論文密級盆奎精子載體法介導(dǎo)生產(chǎn)牛轉(zhuǎn)基因胚胎的初步研究劉榮立學(xué)科專業(yè)動物運(yùn)佳直抽皇鏊殖指導(dǎo)教師陸凰蕉嬰窺旦奎淘鎣嬰究員論文答辯日期2Q!三生魚月三旦學(xué)位授予日期生旦旦答辯委員會主席莊克逸麴援f㈣螋廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同事對本論文的研究工作所做的貢

2、獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬廣西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)保存并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于：口保密，在年解密后適用授權(quán)。d／不保密。(請在以上相應(yīng)方框內(nèi)打“√”)論文柞者簽名：卻喙五指導(dǎo)教師簽名：矽夯氓鉸一一作者聯(lián)系電話：／彩7力尋夕r7夕日期：加馮辜鑰

3、如日期：沙f輯6dj囝電子郵箱：幽缸伽8，“．陰M精子載體法介導(dǎo)生產(chǎn)牛轉(zhuǎn)基因胚胎的初步研究摘要本研究主要探討精子載體法介導(dǎo)生產(chǎn)牛轉(zhuǎn)基因胚胎的相關(guān)影響因素，以便為建立精子載體法介導(dǎo)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因牛的技術(shù)平臺奠定基礎(chǔ)。首先探討了不同個體精液的洗滌次數(shù)、精子與IFN—EGFP質(zhì)粒孵育的時間和濃度、線性／環(huán)狀質(zhì)粒比例等相關(guān)因素對IVF介導(dǎo)的牛轉(zhuǎn)基因效果的影響。試驗選擇廣娟3、6、10號三頭牛的精液，分別洗滌1～4次后檢測精子活力和精子攜帶外源質(zhì)粒的陽性率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，廣娟3號、6號牛精子活力隨洗滌次數(shù)的增加呈顯著性下降(氏O．05

4、)，而廣娟10號牛精子洗滌兩次后的精子活力與洗滌一次和三次的精子活力相比差異不顯著(0．69vs0．77、0．65，P>0．05)，且洗滌三次時精子活力顯著高于廣娟3號和廣娟6號(0．65VSO．57、0．56，P<0．05)；精子孵育質(zhì)粒后其陽性率隨著洗滌次數(shù)增加而增加，廣娟10號牛精液洗滌二次或三次的精子陽性率均顯著高于廣娟6號和廣娟3號(尸<0．05)。當(dāng)廣娟10號牛精子與質(zhì)粒分別孵育不同時間(10min、30min、60min、90min和120min)時，孵育時間為10min、30min組的精子活力與對照組

5、無顯著差異(胗0．05)，且顯著高于60min、90min、120min組(P

6、的質(zhì)粒濃度孵育時，75ng／lxl組的精子陽性率顯著高于其他試驗組(氏0．05)，IVF后試驗組的分裂率和囊胚率間差異不顯著(P>O．05)，但50ng／lxl組的分裂陽性率和囊胚陽性率分別顯著高于25ng／gl、100ng／gl組(38．66％vs26．94％、23．60％：19．05％vs7．14％、5．56％，P<0．05)，而與75ng／}tl組差異不顯著(JP>0．05)。將線性／環(huán)狀比例分別為O：1、1：0、1：1的質(zhì)粒與精子進(jìn)行孵育，各比例組的精子陽性率無顯著性差異(30．47％VS28．86％VS30

7、．21％；P>O．05)，進(jìn)行IⅦ后，各組間的分裂率、分裂陽性率、囊胚率、囊胚陽性率無顯著性差異(P>0．05)。其次比較了精子處理方式、精子與IFN．EGFP質(zhì)粒孵育的濃度對ICSI介導(dǎo)的牛轉(zhuǎn)基因效果的影響。結(jié)果顯示，采用簡單共孵育、NaOH、凍融三種方式處理精子，精子陽性率分別為31．09％、37．19％、48．47％，各組間精子陽性率差異顯著(氏O．05)；分別采用這三種方式處理后的精子進(jìn)行ICSI操作，凍融組的囊胚率顯著低于簡單孵育組(36．15％vs44．93％，P<0．05)，但顯著高于NaOH組(36．

8、15％vs32．11％，P<0．05)，且凍融組的囊胚陽性率顯著高于簡單孵育組(28．29％vsl0．28％，P